河北省兽医实验室理论考试习题（九）

（6）使用正确的储存条件；

（7）操作过程中带口罩、手套、帽子。

8、请简述口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测方法的用途和原理？

答：口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测方法检测针对病毒衣壳蛋白的抗体，可用于不同动物免疫效果的评估工作。

其原理是先将待检血清与一定量抗原结合，占据抗原位点，然后再用已知量的阳性血清与抗原结合，最后通过检测抗原结合阳性血清的多少反推出待检血清中特异性抗体的数量，由于该试验使用酶标抗体不受待检血清来源动物种类的影响，所以适应于各种动物（猪、牛、羊）血清的检测。

9、简述禽流感HI抗体检测方法的用途和原理

答：（1）禽流感HI抗体检测方法的用途主要分两方面：

a、应用标准病毒悬液测定血清中的相应抗体水平

b、应用特异性的抗体鉴定新分离的病毒。

（2）血凝原理因病毒而有所不同，流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素与红细胞表面的受体糖蛋白相互吸附而发生的。当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时的红细胞凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称为血凝抑制反应。（引自农业部兽医局主办2004年全国动物防疫标准培训班材料）

10、 口蹄疫O型正向血凝试验的试验原理是什么？

抗原与其相对应的抗体相遇，在一定条件下会形成抗原抗体复合物，但这种复合物的分子团很小，肉眼看不见。若将抗原吸附（致敏）在经过特殊处理的红细胞表面，只需要少量抗原就能大大提高抗原和抗体的反应灵敏性。这种经过口蹄疫纯化抗原致敏的红细胞与口蹄疫抗体相遇，红细胞便出现清晰可见的凝集现象。

11、简述细菌鉴定的基本方法（从哪几个方面鉴定细菌）？

答：（1）菌落形态观察：观察菌落的大小、形状、隆起度、边缘、表面性状、颜色与透明度、质地和干湿度。

（2）染色镜检：按照革兰氏染色或瑞氏染色方法进行制片、初染、媒染、脱色、复染、干燥、镜检；干燥后，用油镜观察。

（3）常见的生化鉴定：如糖发酵试验、吲哚（靛基质）试验、淀粉水解试验、V-P试验、甲基红（M、R）试验、柠檬酸盐利用试验、硝酸盐还原试验、接触酶试验、氧化酶试验。

（4）血清学鉴定：检定抗原型或血清型。

（5）分子生物学鉴定：利用分子生物学手段进行细菌的种属、亚型的鉴定。

（6）动物试验：测定致病性或毒力。

D、问答题

1、间接ELISA方法的主要原理、试验步骤、结果判定方法（可举例说明）

(1)基本原理：把抗原在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面；测定时，将受检样品和酶标记物按一定程序反应形成复合物，并加入酶作用的底物;反应终止时，根据定性或定量分析有色产物的量来确定待检样品中的抗体的含量。

(2)试验步骤：抗原包被→洗涤封闭→加待检血清（同时设立阴阳性对照）→反应一定时间→洗涤→加酶标二抗→反应一定时间→洗涤→加底物溶液→反应一定时间→终止反应→判定结果

(3)结果判定：肉眼观察或仪器测定，可以阳性与阴性表示结果、以P/N比值表示结果、以终点滴度表示结果或以标准曲线进行定量测定。

2、请说出兽医实验室常用的血清学抗体检测的试验类型？（请回答4种以上）

答：琼脂扩散试验、凝集试验（或玻板凝集、试管凝集、间接血凝、乳胶凝集）、免疫荧光试验、免疫酶组织化学染色、免疫（过氧化物）酶（细胞）单层试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、斑点ELISA(Dot-ELISA)、补体结合试验、（血清）中和试验、免疫电泳、胶体金试纸等。

3、请说出兽医实验室常用的病原学检测试验类型（4种以上）？

答：病原（病毒、细菌、真菌或寄生虫）分离培养与鉴定、凝集试验（或玻板凝集、试管凝集、间接血凝、乳胶凝集）、（间接或直接）免疫荧光试验、免疫酶组织化学染色、免疫（过氧化物）酶（细胞）单层试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、斑点ELISA(Dot-ELISA)、中和试验、免疫电泳、胶体金试纸、核酸探针、(RT-)PCR、荧光PCR、NASBA、基因芯片、核苷酸序列测定（或分析）。

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