猪旋毛虫病诊断技术标准

2.2.2.2 冻肉的染色方法如下：

a)压片:同2.2.1.3.

b)染色：在肉片上滴加1-2滴美蓝或盐酸水溶液,浸渍1min,盖上夹压玻片。

c)镜检：美蓝染色法：肌纤维呈淡青色，脂肪组织不着染或周围具淡。旋毛虫包囊呈淡紫色、蔷薇色或蓝色。虫体完全不着染。盐酸透明法：肌纤维呈淡灰色且透明，包囊膨大具有明显轮廓，虫体清楚。

3、集样消化法

3.1 实验材料

3.1.1 消化液：配制方法见附录B(标准的附录)。

3.1.2 器械：80目铜网(网眼直径为±0.18mm)、漏斗、分液漏斗、凹面皿、组织捣碎机、温度计、加热磁力搅拌器、显微镜(或倒置显微镜)。

3.2 操作方法

3.2.1 采样

3.2.1.1 部位：采集胴体横膈肌脚和舌肌。

3.2.1.2 方法：去除脂肪、肌膜或腱膜。

3.2.1.3 数量：每头猪取1个肉样(100g)，再从每个肉样上剪取1g小样，集中100个小样(个别旋毛虫病高发地区以15～20个小样为一组)进行检验。

3.2.2 绞碎肉样

将100个肉样(重100g)放入组织捣碎机内以2000r/min，捣碎时间30s～60s，以无肉眼可见细碎肉块为度。

3.2.3 加温搅拌

将已绞碎的肉样放入置有消化液的烧杯中，肉样与消化液(见附录B)的比例为1：20,置烧杯于加热磁力搅拌器上，启动开关，消化液逐渐搅成一漩涡，液温控制在40℃～43℃之间，加温搅拌30min～60min，以无肉眼可见沉淀物为度。

3.2.4 过滤

取80目的筛子，置于漏斗上。漏斗下再接一分液漏斗，将加温后的消化液徐徐倒入篮子。滤液滤入分液漏斗中，待滤干后，弃去筛子上的残渣。

3.2.5 沉淀

滤液在分液漏斗内沉淀10min～20min，旋毛虫逐渐沉到底层，此时轻轻分几次放出底层沉淀物于凹面皿中。

3.2.6 漂洗

沿凹面皿边缘，用带乳头的10mL吸管徐徐加入37℃温自来水，然后沉淀1min～2min，并轻轻沿凹面皿边缘再再轻轻多次吸出其中的液体如此反复多次，加入或吸出凹面皿中的液体均以不冲起其沉淀物为度，直至沉淀于凹面皿中心的沉淀物上清透明(或用量筒自然沉淀，反复吸取上清的方法进行漂洗)。

3.2.7镜检

将带有沉淀物的凹面皿放入倒置显微镜或在80~100倍的普通显微镜下调节好光源，将凹面皿左右或来回晃动，镜下捕捉虫体、包囊等，发现虫体时再对这一样品采用分组消化法进一步复检（或压片镜检），直到确定病猪为止。

附录 A(标准的附录)

旋毛虫压片法用溶液配制：

A1 甘油透明液：甘油20 mI，加双蒸水至100 mI。

A2盐酸水溶液：盐酸(HCl)20 mI，加双蒸水至100 mL。

A3美蓝溶液：饱和美蓝酒精溶液5 mI，加双蒸水至100 mL。

附录 B(标准的附录)

消化液的配制：胃蛋白酶(3000国际单位)10 g，盐酸(密度1.19)10 mI，加蒸馏水至1000 mL，加温40°C搅拌溶解，现用现配。

首页前一页12后一页尾页