郭明明 (东北农业大学，黑龙江哈尔滨150030) 核酸疫苗是近年来备受人们关注的一种新型疫苗。由编码能引起保护性免疫反应的病原体抗原的基因片断和载体构建而成。包括DNA疫苗和RNA疫苗，目前研究较多的是DNA疫苗。DNA疫苗是指含有编码抗原基因的真核表达质粒DNA，经直接接种体内后，可被体细胞摄取，并转录、翻译、表达出相应的抗原，然后通过不同途径刺激机体产生针对此种抗原的应答。
l 研究历史
核酸疫苗的发现和研究始于1990年Wolff等在一次基因治疗实验研究中的意外发现。他们在小鼠肌肉组织内直接注射质粒DNA后，质粒及其携带的外源基因可被小鼠肌细胞吸收并能在体内至少两个月稳定地表达蛋白质。
1991年Williams等通过氦驱动的以包被有DNA的微粒轰击鼠肌和鼠肝脏，发现编码的基因在两种组织中的表达存在达14 d以上。
1992年Tang等将外源DNA注射到细胞内后，发现能引起免疫反应。他们将人生长激素基因的质粒DNA通过基因枪转移技术转入到小鼠表皮细胞中，发现产生了特异性的原初免疫抗体应答，并在随后的免疫过程中得到加强。这表明活体 DNA转移后被转染的细胞数及所表达的外源蛋白质的量足以引起宿主对这种在自身体内表达的外源蛋白质产生广泛而强烈的免疫应答，该发现引起学术界广泛的关注。
Ulmer等于1993年将含流感病毒核心蛋白编码基因的质粒载体直接注入小鼠肌肉，使小鼠产生了对该病的免疫保护。同时的报道也表明，编码HA糖蛋白基因的合适质粒通过肌肉注射的方法能够诱导特异的抗体反应，保护机体免受同源的流感病毒的感染。至此，核酸疫苗的概念深入人心，其作为第3代疫苗的地位得到确认。同年Robinson等首次报道了核酸疫苗在鸡中的应用。他们将编码流感病毒H7N7株血凝素(HA)基因DNA以不同免疫途径(皮下、腹腔内及静脉内)免疫3周龄鸡，可对致死量的H7N7株病毒鼻内攻击产生50％的保护。Fyalia等用H7-NA的质粒DNA通过静脉、肌肉、皮下注射，点眼等免疫方法免疫3周龄鸡，4周龄进行第2次免疫，第6周用致死量的毒进行攻击，免疫鸡的存活率达10％～63％。
1994年Wistar研究所Xiang等将编码狂犬病病毒RV糖蛋白的cDNA插入质粒DNA，在SV40早期启动子控制下表达。用该质粒DNA直接免疫小鼠腓肠肌，免疫3次，间隔2—3周，每次150μg。免疫后小鼠产生了抗RV中和抗体、抗RV糖蛋白特异性CTL和分泌淋巴因子的T辅助(Th)细胞，末次免疫后2周用半致死量(LD50)病毒标准株(VCS)攻击，结果均获得完全的保护作用；而用空白载体质粒免疫的对照组在相同剂量攻击下14 d内全部死亡。世界卫生组织于同年和1995年专门召开了两次国际性会议，对核酸疫苗进行了命名，讨论了核酸疫苗的临床研究情况，并成立了专门小组来讨论其标准化及控制。
1996年Sakaguchi等将编码新城疫病毒(NDV)F蛋白的环状和线状质粒DNA 100μg分别肌肉注射1周龄鸡，结果显示只有注射线状质粒DNA的鸡产生特异抗体，并受到保护。同年李建伟等扩增MDV主要免疫基因(gB基因)的pUCl9质粒并制成DNA疫苗，分别以200μg和500μg总剂量肌注免疫雏鸡，1日龄和9日龄各免疫接种一次，第2次免疫后1周，进行强毒攻击。试验期间，对死亡鸡记录并剖检。试验期结束时(11日龄)所有存活鸡全部宰杀剖检。结果显示，空白质粒对照组鸡的MD阳性率分别为84．62％(11／13)，两组试验组分别为15．38％(2／13)和23．08％(3／13)。试验初步证明，MD DNA疫苗有明显的免疫保护作用。
1997年陈化兰等将禽流感病毒A／Afir．／Eng-Q／983／79(H6N1)株血凝素基因eDNA置于SV40启动子和增强子下游，构建了HA基因表达质粒pSVH7。以此质粒肌注3周龄SPF鸡，免疫后第4周用100倍最小鸡胚感染量的HA基因同源病毒人工感染，1周后用棉拭子取样进行泄殖腔病毒分离。免疫后每周及攻毒第l、2周采血，微量血凝抑制法检测抗体。病毒分离阴性结果：100μg／只组为6／6，10μg／只组为4／6，1μg／只组为5／8，空白对照为0／6。表明所构建的H7亚型HA基因表在质粒可诱导鸡产生有效的免疫保护反应。以上实验结果都证实禽流感DNA疫苗有广阔的发展前景。同年Kalihali等也做了关于禽流感核酸疫苗的试验，结果与1993年Rob． inson和Fyana等的实验结果类似。
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