时间：2009-12-23 点击： 次 来源：中国畜牧业信息网 作者：阳光畜牧网 - 小 + 大
4 、诊断 因PR无特征性剖检变化，对该病的诊断必须结合流行病学，实验室诊断进行确诊。目前常用的方法有兔体接种试验、电镜观察、常规血清学方法和分子生物学方法。 4.1 病毒分离和鉴定 可从患猪脑、心、肝、肺、肾及扁桃体等组织中分离病毒。采取脑组织、扁桃体，用PBS制成体积比为10%悬液或鼻咽洗液接种细胞。PRV的细胞谱很广，Marc145(非洲绿猴肾细胞), BHK(仓鼠肾细胞), IBRS-2, Vero, 原代鸡胚成纤维细胞和原代犊牛睾丸细胞等均可用于病毒分离。样品采集时最好将2～3只感染猪的组织混匀，经灭菌的平衡盐溶液或生理盐水稀释后接种在培养成单层的细胞上，观察至出现特征性细胞病变。有病变的细胞用H·E染色，镜检可看到嗜酸性核内包涵体，也可进一步以电镜等方法鉴定。 4.2 兔体接种试验 病毒悬液经2000转/分钟离心10分钟，取上清液1～2毫升经腹侧皮下或肌肉接种家兔，通常在36～48小时后注射部位出现剧痒，病兔啃咬注射部位皮肤，皮肤脱毛、破皮和出血，继之四肢麻痹，体温下降，卧地不起，最后角弓反张，抽搐死亡。 4.3 血清学诊断 多数血清学方法可用于检测血清样品中的PRV抗体。应用最广泛的方法是微量血清中和试验(MSN), 酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LA)、补体结合试验(CF)、琼脂免疫扩散(AGDP)、对流免疫电泳(CIE)、间接荧光抗体技术 (IFA)、荧光抗体技术(FA)等。 4.3.1 微量血清中和试验 这是检测病毒的比较经典的血清学方法，是大多数国家检测伪狂犬病的法定方法之一。由于微量血清中和试验可直接在微量培养板上进行检测，所以应用比较方便。虽然检测结果敏感性和特异性较高，但需要很长时间才能得出结果。 4.3.2 酶联免疫吸附试验 ELISA是最常用的诊断方法之一，获得许多国家官方认可，已有商品化诊断试剂盒应用。该法省时、经济，可自动操作和批量检测。敏感性强于SN，特异性不如SN。 4.3.3 免疫荧光试验 直接FA技术，对病猪活体取鼻咽试纸涂片，对病死猪取扁桃体、三叉神经节、脑、脊健和鼻粘膜涂片，检出率高达95%以上。 4.3.4 乳胶凝集实验 乳胶凝集实验利用抗原和抗体特异性结合的特点，将抗原先用乳胶包被，然后再与相应血清反应，如果几分钟内凝集反应呈现阳性，则判为伪狂犬病感染。 4.4 PCR技术 PCR方法检测PRV快速、特异、敏感。与常规的血清方法相比具有很大的优越性。 4.5 强弱毒鉴别诊断 主要有鉴ELISA、鉴别PCR等，可将伪狂犬病基因缺失疫苗免疫猪和自然感染猪区分开。 5、 防治 伪狂犬病的治疗目前尚无有效办法，常规药物治疗均无效。控制伪狂犬病应采取综合性措施，如引种时的检疫、加强环境的消毒及灭鼠等。 5.1 严把检疫关 坚持自繁自养，最好不要从外面引种，严禁从疫区引种。对要引入的种猪必须每头采血样检测抗gE抗体，如抗gE抗体阴性，方可引入猪群。 5.2 严格执行消毒措施 PRV对外界环境抵抗力很强，但一般浓度的消毒药却能将其杀死，如0.5%石灰乳或0.5%碳酸钠消毒l分钟，5%石炭酸消毒2分钟和1～2%氢氧化钠可立刻杀死病毒。所以对猪舍地面、墙壁、设施及用具等每周应定期消毒1次以上。发生疫情时则2～3天消毒1次，消毒液可用2～3%火碱溶液或20%新鲜的石灰水。 5.3 积极开展防鼠灭鼠工作 鼠是伪狂犬病病毒的携带者，它可通过污染饮水、饲料及猪舍用具而使猪只感染，因此消灭饲养场的鼠类对控制本病具有重要意义。 5.4 伪狂犬病呈地方性流行的地区，实行广泛的免疫接种 目前我国该病的发病率较高，流行较广，采取淘汰扑杀阳性猪还为时过早，应采取高密度接种，提高猪群整体免疫力，降低该病造成的损失，待发病率明显降低后，再结合使用鉴别诊断方法，从种猪场着手剔除野毒感染猪，净化该病。虽然接种疫苗不能完全阻止猪感染伪狂犬病病毒，但免疫接种仍是预防和控制伪狂犬病的根本措施。 伪狂犬病疫苗分为基因缺失弱毒疫苗 (包括自然缺失和人工缺失)和全病毒灭活疫苗两种。弱毒疫苗由于具有良好的免疫原性及低廉的价格，在欧美等国家应用最多，市场占有率达90%以上；灭活疫苗安全性好，免疫猪不存在排疫苗毒问题，但灭活疫苗的免疫效力一般较差，而且接种剂量又较大，并偶而有过敏反应等缺点，所以实际应用较少。 从国外引进的伪狂犬病病毒Bartha-K61株制成的弱毒冻干疫苗伪狂静，它是gE/gl基因自然缺失的弱毒疫苗。由于gE/gl基因是自然缺失，弱毒回复毒力的可能性极低，用于制造疫苗几十年来均未有毒力返强的报道。伪狂静对猪及各种动物安全，免疫效果确切，免疫期长，价格低廉，使用方便，全国每年都有数千万头猪应用于猪伪狂犬病的免疫。 |
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