时间：2011-01-25 点击： 次 来源：中国兽医药品监察所 作者：佚名 - 小 + 大
| 2.1.2免疫学检测技术 目前，我国防控实践中应用的比较成熟的免疫学检测技术主要有虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）、补体结合试验(CFT)、全乳环状反应（MRT）。除SAT外，这些试验技术与国际上采用的技术是一致的。 传统方法的凝集试验（包括SAT和平板凝集试验）在发达国家已基本上停止使用，取代的方法是缓冲布鲁氏菌抗原试验（BBAT）、RBT。这两种试验除保持了快速凝集试验的高敏感性外，还由于采用低pH值而减少了非特异性反应。在国际贸易中，BBAT、RBT是牛、羊、猪种布鲁氏菌病诊断的指定试验，作为筛选试验用。 CFT至今仍是布鲁氏菌病的重要诊断方法，是牛、羊、绵羊副睾种布鲁氏菌病诊断的国际贸易指定试验，作为确诊试验用。也是公认的高特异性试验，但是由于试验操作繁杂，又难以标准化，并且敏感性降低，所以在实际防控中使用并不多。 MRT由于使用非常方便，并且具有良好的敏感性，是奶牛布鲁氏菌病监测的主要方法。 酶联免疫吸附试验 (ELISA)是上世纪90年代发展起来的一种高敏感性的试验技术，而且操作更方便。ELISA既可以作为确定试验，又可以作为筛选试验。进入21世纪以来，OIE已将其列入国家贸易指定试验。ELISA方法不但用于血清学诊断，还可用于乳汁检查。猪种布鲁氏菌和绵羊副睾种布鲁氏菌亦已有成熟的ELISA诊断技术。关于ELISA的研究报道相当多，表明这是一种大家认为比较有前途的诊断方法。ELISA效果的关键在于抗原的选用。在已经标准化了的牛布鲁氏菌病ELISA诊断中，目前OIE推荐的是使用S-LPS抗原。有报道说，从牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌获得了能表达高度免疫原性蛋白的基因，其生产的蛋白可用于鉴别S19和Rev.1疫苗免疫与自然感染。用绵羊副睾种布鲁氏菌表面抗原及用重组蛋白和单克隆抗体作为ELISA抗原，认为可获得良好的诊断结果。对于ELISA技术来说，除所使用的抗原对技术的敏感性特异性有决定性影响外，还受到对敏感性特异性选择，当提高敏感性时，就会降低一定的特异性。 由于凝集试验不适合绵羊副睾种布鲁氏菌病的诊断，一种琼脂凝胶免疫扩散 (AGID)试验就成为绵羊副睾种布鲁氏菌病的常用诊断方法。但未被采纳作国际贸易指定试验。 荧光偏振试验（FPA）是OIE认为敏感性、特异性与ELISA相当的试验，美国于2004年将FPA确定为官方确证试验。Gall D等用荧光偏振法检测牛种布鲁氏菌，并与其它血清学检测方法进行了比较。认为荧光偏振法是检测牛布鲁氏菌最稳定的血清学方法，其敏感性和特异性在初步评价中分别为92.1%和99.4%，在后续的封闭试验中分别是96.3%和97.6%。通过双盲实验证实荧光偏振法还可以区别牛种布鲁氏菌感染和疫苗株S19免疫接种。Minas A等研究显示，FPA检测羊布病的敏感性和特异性分别可达到94.9%~97.7% 和97.2%~98.4%。 对于现用的主要布病血清学检测技术，不同的研究报道有着不同的结果，甚至有不同的结论。这与技术方法、样本数量、个体差异等因素有关。下表总结了部分研究报道显示的布病血清学检测技术的敏感性和特异性，总体来说，敏感性以RBT、iELSA、FPA为高，特异性以cELISA、CFT、iELSA为高。 表2 不同试验方法的敏感性和特异性
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