－谈PRRSV的生存能力、样品保存和检测
郭艳华 朱连德
勃林格殷格翰动物保健，北京100004 猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)最早被称为“神秘病”。该病临床症状多样，病毒的致病机理和免疫反应机制复杂。虽然科学家对该病开展了大量研究，但至今仍无统一明确的认识。由于其‘神秘’、复杂，还有样品采集时间、保存环境及检测方法不同，给诊断带来一些不确定性。有时同一样品不同实验室，或同一个体的不同样品同一实验室会得出不一样的诊断结论。更多认识PRRSV的生存能力，可正确采集和保存样品，以此提高PRRS的诊断水平和准确反映PRRSV的检出率。只有进行科学检测，正确分析，才能得到准确的猪场PRRS感染信息，进而安排合理的免疫程序，达到最佳的免疫控制效果。
一、PRRSV在环境中的生存能力
首先是温度对PRRSV存活力的影响。Dee等开展试验对其进行了研究。试验中他们尝试在温暖(10到16℃)或寒冷(<0℃)的天气中通过模拟猪场的一系列连续事件来研究PRRSV的机械传播。这些研究显示温暖的条件下有可能发生PRRSV机械传播，但发生机率远远低于寒冷条件下。因此在天气寒冷的季节要尤其加强猪场的生物安全管理， 阴性动物被PRRSV感染后，在一段时间内可通过唾液、鼻粘液、尿、母猪奶和公猪精液向环境排出病毒。因为PRRSV是一种很难培养的有囊膜的RNA病毒，所以最初人们认为该病毒在猪体外的存活时间很短。Pirtle等研究了室温条件下（25~27℃）PRRSV在猪场常见的无机物(污染物)上的稳定性，包括塑料、不锈钢、木材锯末、稻草、玉米、唾液、尿液和粪便。由此，他们发现病毒在固体和疏松样品中PRRSV最不稳定，25-27℃1天后这些材料中检测不到感染性病毒。而病毒在液体污染物中的存活力较强，其中井水中可检测到病毒的时间为9天，城市水中为11天。因此PRRSV排毒猪对饮用水和废水的污染可能是敏感猪感染病毒的源头。
有些研究显示病毒可被分泌入粪便和尿液，猪粪可作为有机肥料撒入田野，那么我们需要了解的很重要的一点就是各种条件下肥料或猪粪中的病毒能够存活多长时间。Pirtle等的研究显示这一时间不长。但明尼苏达州Ajariyakhajorn等的研究发现4℃、pH7.0条件下，14天后猪粪中的PRRSV毒株才会失活。最近Dee等尝试测定4℃时废水池中的PRRSV存活时间。试验期间(第1天到第10天，第13天)废水样品PCR结果均为阳性。接种后8天的病毒分离结果也均为阳性。取样期间pH值从7.5到8.0不等。
因此似乎PRRSV可在环境中存活相当长一段时间。如果这一重要的病原在猪体外能够较好的存活，尤其是寒冷潮湿的条件下，那么就出现了另外一个问题即最佳的消灭该病毒的方法是什么。Shirai等报道了室温条件下，氯(0.03%)可在10分钟内完全灭活PRRSV，碘(0.0075%)为1分钟，季铵化合物(0.0063%)也是1分钟。近来Dee等对杀灭被污染运输工具上PRRSV的不同方法进行了评价，发现干燥是消毒程序中的关键环节，单独清洗和消毒运输工具(使用1:256酚；10分钟作用时间),并不能避免随后与其接触的哨兵猪被感染。清洗、消毒并干燥(20℃12小时)确实能够阻止哨兵猪被感染。然而最近Dee等又发现使用26%氯化季铵和7%戊二醇(1:128，两者是60或90分钟)消毒无需干燥也能使PRRSV失活。
二、样品的选择与保存
PRRSV不同组织的含量不同，取样后在环境下的存活能力也不同，不同的保存温度对组织中的病毒也有很大影响。这就意味着我们在采样进行病毒分离或检测时要选择性。有人对特定时间和温度条件下样品从田间运输到实验室过程中病毒在血清和组织中的存活情况进行研究。Van Alstine等发现-20℃和4℃条件下存放72小时后 5份肺、脾及胸腺组织中有4份可分离到病毒，5份血清样品中均可分离到病毒。25℃条件下，5份肺、脾、胸腺和血清样品中可分离到病毒的样品数分别为1，0，0和4。作者总结道血清是极佳的用于病毒分离的样品。
污染了PRRSV的精液是否能够传播PRRS，这仍是一个存在争论的问题。1995年S. L. Swenson等发现使用污染PRRSV的精液人工授精小母猪能够显著降低小母猪的受孕率。因此现在很多种猪公司在出售精液前都会对其进行检测，多采用间接荧光抗体滴定(IFA)。然而，Jane Christopher-Hennings等的研究发现存在以下情况：急性感染过程中当IFA和病毒中和检测(VN)为阴性但精液中含有病毒RNA，或检测结果为阳性但精液中不含病毒RNA。同时通过对血液样品和精液样品进行病毒分离(VI)和PCR检测，他们还发现病毒血症和血清血状况不足以判断精液中是否排出PRRSV。VI结果还显示所有试验公猪的病毒血症维持时间都较短，并且均在精液排毒停止前就已经停止。由此他们得出结论PCR检测精液样品是确定某一时间点精液中是否含有PRRS RNA的较为准确的方法。
|
