摘 要：应用病理学和PCR方法，对浙江某猪场送检的疑似猪皮炎肾病综合征(PDNS)病猪进行诊断。结果发现肾脏呈现纤维蛋白性肾小球肾炎变化，真皮及皮下血管表现为坏死性脉管炎，淋巴组织中大量淋巴细胞缺失、多核巨细胞浸润，PCR扩增产物显示猪圆环病毒2型(PCV-2)阳性。结果表明，该猪场感染了PCV-2，并表现为PDNS的病理特征。
关键词：猪皮炎肾病综合征；组织病理学；猪圆环病毒2型；聚合酶链反应 控制
猪皮炎肾病综合征(Procine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS)是与猪圆环病毒2型(PCV-2)感染相关的一种新的疾病，据报道，PDNS的发生与PCV-2感染紧密联系在一起。PCV-2最早是1996年Clark等从加拿大的无特定病原(SPF)猪中分离鉴定的，并认为是引起断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原体[1-3]。在英国等国家的PDNS发病猪群病死率在0.25%～20%，甚至更高，死亡猪多呈急性肾衰竭，未死亡的病猪一般在发病后7 d～10 d康复[4]。近年来我国对猪圆环病毒感染的报道较多，但大多为PCV-2与其他疾病混合感染，而对猪皮炎肾病综合征的病例报道很少，本试验对临床疑似PDNS的1例病猪进行了病理学观察和PCR检测，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 动物来源
浙江某猪场饲养长白肉猪400余头，饲养至65 kg左右时，10头猪后肢、会阴、胸、腹和耳朵等部位皮肤开始出现圆形或不规则的红色或紫红色斑块，有的坏死后形成结痂，病猪体温、食欲和精神状态变化不大。其中1头死亡，被送到上海市动物疫病预防控制中心诊断。 
1.2 病理学观察
对送检病猪进行大体剖检，观察并记录病理剖检变化。取病变皮肤、肺脏、肾脏、肝脏、脾脏、淋巴结、扁桃体等组织用100 mL/L甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片，苏木素-伊红(HE)染色，显微镜观察。
1.3 PCR检测样品
1.3.1 样品前处理 取病猪肺脏、肝脏、脾脏、肾脏和淋巴结，混样剪碎、研磨、PBS匀浆，7 500 r/min离心5 min，取上清液备用。
1.3.2 病毒DNA的提取 按核酸滤膜提取说明书进行，购自香港基因芯片有限公司。取待检匀浆上清液250 μL，加500 μL buffer V-A混匀，室温静置5 min；加125 μL buffer AP2，和125 μL buffer V-B，颠倒混匀；12 000 r/min离心5 min，取850 μL上清于装有柱子的2 mL离心管中；5 000 r/min离心1 min，弃废液，加700 μL buffer W1A；6 000 r/min离心1 min，弃废液，加700 μL buffer W2漂洗液；12 000 r/min离心1 min，弃废液，加700 μL buffer W2漂洗液；12 000 r/min离心1 min，将柱子套入一新1.5 mL管，加40 μL buffer TE；室温放置1 min,12 000 r/min离心1 min；管中收集的即为提取的病毒DNA，－20 ℃保存备用。
1.3.3 猪圆环毒病的PCR检测 酶及其他PCR所需试剂购自宝生物工程(大连)有限公司。设计特异性引物，预扩增片段大小为1 154 bp。上游引物P1：5′-CCG CGGGCTGGCTGAACTT-3′；下游引物P2：5′-ACCCCCGCCACCGCTACC-3′(引物由上海鼎安生物有限公司合成)。PCR反应体系：10×PCR buffer(含MgCl2)2.5 μL，dNTPs(2.5 mmol/L)2.0 μL，引物(25 pmol/μL)各1 μL，Taq DNA聚合酶(5 U/L)0.5 μL，DNA模板4.0 μL，加双蒸水至25 μL。PCR反应条件：预变性94 ℃ 5 min；94 ℃ 1 min，53 ℃ 1 min,72 ℃ 1 min， 35个循环；72 ℃延伸7 min。取5 μL PCR产物在11 g/L的琼脂糖凝胶上进行电泳(电压100 V，电泳30 min)，在凝胶成像系统上观察目的片段。
2 结果
2.1 剖检病变
病猪下颌淋巴结、腹股沟淋巴结肿胀、出血，肠系膜淋巴结肿胀、坏死。脾肿胀、出血。肾脏肿大，皮质苍白，髓质水肿。心肌有出血点，心冠脂肪水肿。肺局部实变。腹部皮下有胶胨样渗出。 
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