非洲猪瘟病毒I177L基因缺失毒株鉴别检测规范

表1 每个反应体系配置

6.2 荧光PCR扩增条件

50℃2分钟；95℃5分钟；95℃15秒，60℃1分钟，40个循环，在每一循环的60℃时收集FAM和VIC荧光信号。

6.3 结果分析

Ct值由荧光PCR仪软件自动确定。

6.3.1试验成立条件

阳性对照中P72和I177L基因的Ct值均应<35且出现特异性扩增曲线，阴性对照的P72和I177L基因均应无Ct值或Ct值≥40且无特异性扩增曲线。同时满足上述条件时试验结果有效，否则应重新进行试验。

6.3.2 检测结果判定

FAM通道对应P72基因，VIC通道对应I177L基因。被检样品Ct值≤38且出现特异性扩增曲线时，判为目标基因阳性；无Ct值或Ct值≥40时，判为目标基因阴性；38

6.3.3 综合判定

最终判定应结合P72和I177L两个基因的检测结果进行综合分析,具体判定标准见表2。

表2 综合判定标准

注: “+”代表阳性；“-”代表阴性。

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