浓戊二醛防冻消毒剂的防冻及消杀效果

摘要：为考察添加防冻剂（乙二醇）的浓戊二醛消毒剂防冻及消杀效果，对不同温度条件下添加不同量防冻剂的浓戊二醛消毒剂（防冻剂/浓戊二醛消毒剂体积分数分别为2%、3%、4%、8%、10%、12%、14%）进行了冻结试验，并对其抑菌及杀灭非洲猪瘟病毒效果进行了验证，利用硫酸滴定法检测防冻剂对浓戊二醛有效含量及稳定性的影响。结果显示：添加不同量防冻剂的浓戊二醛消毒剂在-10、-20 ℃条件下均有良好的防冻效果。添加防冻剂后的消毒液（体积分数10%、12%）进行100倍稀释后抑菌圈可达到标准要求，且抑菌圈平均大于不加防冻剂消毒液1 mm左右。5%稀释、12%体积分数的防冻消毒剂，在20 ℃条件下作用10 min，10 ℃作用30 min，0 ℃作用60 min，均能完全灭活非洲猪瘟病毒；10%稀释的防冻消毒剂-10 ℃条件下作用30 min，20%稀释的防冻消毒剂-20 ℃条件下作用30 min，均能完全灭活非洲猪瘟病毒。经硫酸滴定，该防冻剂理化性质稳定，首次检定与24、48 h后检定的结果并无太大差距，消毒剂有效含量分别为96.7%、96.2%和95.6%。结果表明，低温环境下添加体积分数12%的防冻消毒剂具有很好的防冻效果和贮存稳定性，并且能够有效杀灭细菌及非洲猪瘟病毒。本研究为东北地区冬季选择合适的防冻消毒剂提供了技术支撑。

2018 年我国首发非洲猪瘟疫情。非洲猪瘟疫情对我国生猪饲养以及屠宰、运输、兽药、饲料等相关产业都造成了极大冲击，造成的损失不可估量。非洲猪瘟是我国的一类动物疫病，发病率、病死率可高达 100%。针对非洲猪瘟，目前仍没有有效的疫苗可用，因此隔离传染源、切断传播途径是最有效的防控措施。其中，消毒是最直接、有效、简单的控制手段之一，做好疫点、疫区消毒工作，可以有效抑制疫情扩散。浓戊二醛是新一代醛类消毒剂。它不仅克服了甲醛消毒剂的诸多缺点，也具有很强的广谱杀菌能力，是当前醛类消毒剂中应用较广的一种消毒剂，在农业农村部公布的《非洲猪瘟疫情应急实施方案》（第五版）中被列为推荐的消毒剂种类，主要应用于车辆等运输工具、畜舍建筑物、围栏、木质结构物、水泥表面、地面等的消毒，是生猪饲养场常用的开放环境消毒药。

东北地区冬季温度常达 -20 ℃以下，室外喷洒浓戊二醛消毒剂很快就会结成冰膜，直接限制了消毒液颗粒的运动，既起不到消毒作用，也会对路面行车安全造成隐患，对疫点、疫区的疫病防控以及省界动物卫生监督检查站、饲养场户的冬季日常消毒造成极大困扰。为解决东北地区冬季消毒问题，向浓戊二醛消毒剂中添加不同量的防冻剂，并开展防冻及消杀效果试验，筛选最佳防冻剂添加量。

1　材料与方法

1.1　材料

防冻剂：主要成分为乙二醇，由沈阳伟嘉生物技术有限公司提供；消毒剂：20% 的浓戊二醛成品（批号 2020120101），由沈阳伟嘉生物技术有限公司提供；非洲猪瘟病毒：以高致病性 Pig/HLJ/2018 毒株为骨架，构建携带 GFP 标签的感染性克隆毒株，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（国家非洲猪瘟专业实验室）鉴定和保存；标准菌：金黄色葡萄球菌（G+）与大肠杆菌（G-），购自广州市辰飞生物科技有限公司；营养琼脂：沈阳伟嘉生物技术有限公司提供。

1.2　方法

1.2.1　防冻性能测试标准 参照国家卫生健康委办公厅印发的《低温消毒剂卫生安全评价技术要求》。

1.2.2　防冻性能测试试验　将防冻剂分别以 2、3、4 mL 的添加量加入到 100 mL 浓戊二醛成品中（对应体积分数分别为 2%、3%、4%），充分溶解，在 -10 ℃条件下放置 24 h，记录防冻情况；将防冻剂分别以 8、10、12、14 mL 的添加量加入到 100 mL 浓戊二醛成品中（对应体积分数分别为8%、10%、12%、14%），充分溶解，在 -20 ℃条件下放置 24 h，记录防冻情况。将不添加防冻剂的浓戊二醛成品作为空白对照组，在 -20 ℃条件下放置 24 h，记录上冻情况。

1.2.3　抑菌试验　依据《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》（GB/T 38502—2020），用斜面培养基分别培养金黄色葡萄球菌与大肠杆菌，培养好后冷藏备用。配制营养琼脂，灭菌备用。在玻璃平皿中加入 20 mL 营养琼脂，凝固后用生理盐水冲洗斜面培养基，取 3% 的菌液加入凉至 45 ℃以下的营养琼脂中，摇匀；取 5 mL 加入平皿中，凝固后摆放 4 个牛津杯，统一加样量为 200 μL（孔径6 mm），分别加入生理盐水（孔 1）以及不加防冻剂消毒剂（孔 2）、10% 防冻消毒剂（孔 3）和12% 防冻消毒剂（孔 4）的 100 倍稀释液，盖上陶瓷盖 37 ℃恒温培养 12~16 h 后观察抑菌圈大小。

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