2.4 支原体PCR鉴定 将肺脏组织应用PPLO固体培养基培养,可观察到煎荷包蛋样菌落。典型菌落的特异性PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳结果显示,获得了与预期大小一致的238bp片段(图4),证明分离株为牛支原体;对阳性片段回收测序,发现分离株与牛支原体国际标准株PG45(GeneBank号CP002188)、地方株FJ-HJ株(GeneBank 号KX230478)、HB0801株(GeneBank 号CP007591)、CQ-W70(GeneBank 号CP005933)16S rRNA基因序列相似性介于96.9%~98.5%。
2.5 IBRV和BVDV的PCR检测 病牛血液BVDV、IBRV PCR检测结果显示,未获得目的条带(图5),检测结果为阴性。
2.6 药敏试验 按照CLSI标准和配套的试剂盒操作步骤及判定标准,对分离菌株进行药敏试验。结果显示,分离菌株均表现出不同程度的耐药性:牛巴氏杆菌对环丙沙星、氟苯尼考、阿奇霉素、头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶敏感,牛支原体对左氧氟沙星、阿奇霉素敏感,两种病原对临床普遍使用的青霉素、磺胺类、四环素类、大环内酯类、氨基糖苷类等表现出全部耐药(表2)。
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