2 结果与分析 2.1 临床剖解 病死牛剖解病变主要表现为:肺部淤血肿大,呈暗红色(图1-A),切开后流出纤维素性浸出液,切面呈大理石状,部分出现胸壁粘连,肺心叶有多个黄豆大、黄白色坏死灶,胸腔积液;肝脏肿大,表面有灰白色坏死灶;胆囊显著肿大;心外膜、心冠脂肪有出血斑点,尤以心耳出血明显(图1-B);淋巴结水肿、出血,肠道广泛性出血。
2.2 染色镜检 对采集的心血、肺脏、肝脏、脾脏组织涂片瑞氏染色镜检。从心血、肺脏涂片中发现单一的、两极浓染的球杆菌,可见明显的荚膜;心血涂片可见红细胞形态不规则,中间出现空洞,红细胞表面附着大量虫体,呈链状排列,红细胞呈星形(图2)。初步判定为,巴氏杆菌与附红细胞体的混合感染。
2.3 细菌鉴定 将从肺脏组织中分离到的菌落进行分离纯化,经全自动微生物鉴定仪鉴定,发现生化反应结果符合牛多杀性巴氏杆菌特性(可信度为99%),初步鉴定为牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm);对分离纯化的菌落进行PCR特异性扩增,琼脂糖凝胶电泳,结果发现在460bp处均出现与目的片段一致的条带(图3),测序结果与GeneBank数据库中多杀性巴氏杆菌同源性达99%以上。
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