兽医战略
小反刍兽疫研究进展
|
5.1 初步诊断 根据动物发病的流行病学特点、病畜的临床症状以及病理解剖变化等特点可以进行初步诊断。但是必须注意牛瘟（RP）、口蹄疫（FMD）、蓝舌病（BT）、山羊传染性胸膜肺炎、巴氏杆菌性肺炎等疾病的鉴别诊断。 5.2 实验室诊断 5.2.1 样品采集 实验室样品可以采集病畜的眼下结膜、鼻腔以及直肠黏膜等部位的分泌物棉拭子，也可采集凝固的血液或加抗凝剂的全血。病畜剖解后可无菌采集有典型病变的组织样品，如肠系膜或支气管淋巴结以及肺脏、脾脏、扁桃体等器官组织[8]。 5.2.2 病毒的分离 样品采集后可以用原代羔羊肾细胞或非洲绿猴肾细胞（Vero）进行分离培养病毒。PPRV产生的CPE要在接种细胞培养后的5～6 d才能够出现，具体表现为细胞变圆、收缩，形成多核巨细胞体，有的出现核内包涵体，部分细胞形成空泡。由于CPE出现的较慢，需要一定时间，所以一般在细胞培养4～5 d后应进行盲传继代。 5.2.3 琼脂凝胶免疫扩散试验（AGID） 该试验所用的标准PPR病毒抗原是由肠系膜或支气管淋巴结、脾脏或肺组织材料加一定的缓冲液配制而成；所用的标准抗血清是以5 mL含有104TCID50/mL的PPRV高免绵羊，每周注射一次，连续注射4周。在最后一次注射后5～7 d时采血，提取血清制备而成的。Obi tu等采用PPRV的细胞适应毒接种兔子制备的抗PPRV高免血清进行AGID试验，能够与麻疹病毒属的其他3种病毒发生交叉反应，但是如果将其进行1︰100稀释以后，则仅和其同源的PPRV呈阳性反应。这是一种相对简单、快速和廉价的检测方法。但是它的敏感性较低，不能检测微量抗原，因此也就不能对疾病作出早期诊断[9]。 5.2.4 间接免疫荧光抗体试验（IFAT） 据报道，应用PPRV的特异性单克隆抗体建立了间接荧光抗体检测方法，能够检测出PPR感染发病的早期和后期病料中的病毒抗原，并且这种方法能够快速对PPR和RP进行鉴别诊断。 5.2.5 病毒中和试验（VN） VN具有很强的特异性。可以鉴别PPRV和RPV，也可以鉴别PPRV的不同毒株之间的差异。但是VN也存在明显的不足：耗费时间较长，一般需要10～12 d才能得到结果；需要细胞培养病毒及无菌的试验样品；浪费人力，很难实现大规模样品的监测。因此这种方法在野外条件下，尤其在发展中国家使用起来十分的不便。 5.2.6 酶联免疫吸附试验（ELISA） 应用ELISA方法监测血清的方法已经十分的成熟，而且有多种试验方法。间接ELISA方法就是将抗原吸附在酶标板上，然后加入PPRV的病毒特异性血清孵育，最后加入酶结合物和底物监测血清中的特异性抗体。这种方法容易受到待检材料中的其他蛋白的干扰。针对这一问题，应用免疫捕获ELISA（夹心ELISA）方法可以更为精确的检测，即将待检样品首先和特异性抗体反应形成免疫复合物，这种复合物随后被预先包被在酶标板上的二抗（捕获抗体）所结合，再按常规的方法加酶结合物和底物等进行[10]。 6 国内外研究进展 6.1 国内研究发展现状 我国对小反刍兽疫病的研究还处于起步阶段。最近几年，随着SARS、禽流感等几次大规模国际性人畜传染病的暴发，PPR在我国周边地区的蔓延引起了国内的重视。近年来，中国检疫检验科学研究院、云南出人境检验检疫局、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心等单位开展了相关的研究，主要是以检验检疫技术为主，建立了RT-PCR检测小反刍兽疫病毒核酸的方法和进行N、H 基因的克隆和原核以及真核表达。其后又在此基础上引入了巢式PCR技术，在第一次PCR产物的基础上进行二次PCR，提高了反应的特异性。 6.2 国际研究发展现状 最近几年国际上在小反刍兽疫方面的研究取得了长足发展，以英国动物健康研究所、印度新德里和班加罗尔的几个研究所为代表的研究机构，先后发表了数十篇相关论文。英国科学家Bailey等公布了第一个小反刍兽疫病毒的全基因序列，并发现PPRV在核酸水平上与RPV非常相似，但在多肽结构上却更接近于DMV，这为构建感染性克隆、基因功能组学、PCR引物设计，病理学研究奠定了基础。韩国科学家于2005年，利用单克隆抗体和缺失变异株对PPRV核衣壳蛋白（N 蛋白）的抗原表位进行了分析，最终确定4个抗原性区域（A—I，A一Ⅱ，C-I，C-II）。有学者研究发现Marmo-set B95a细胞可以替代Vero细胞来增殖PPRV。Marmoset B95a是一种E-B病毒改造的狨猴B淋巴细胞的衍生细胞系，它比一般所用的Vero细胞更利于麻疹病毒属的繁殖与分离，这对于PPRV 的研究是一件非常有用的工具。 |
下一篇：禽流感疫情正式公布后的10年之路