检疫监督
上海地区病死猪主要病毒病感染状况调查
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近年来，猪病的发病情况日趋严重，病原较复杂，发病率和死亡率均有所上升，就病毒性疾病而言，仍然以猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reprodu- ctive and respiratory syndrome，PRRS)、猪伪狂犬病( Pseudorabies，PR)和猪圆环病毒病2型(Procine cirovinus type 2，PCV-2)发生较普遍。多重感染或混合感染仍然普遍存在，致使病情加剧，病死率升高，给防疫工作增加困难，给养猪户和养猪业造成巨大经济损失。本研究针对2006-2009年上海地区规模化猪场和散养户的临床发病病例的内脏样品，通过荧光RT-PCR方法进行病原学检测，目的是为摸清四种疫病在上海及周边地区的整体流行状况，为更好地做好预防和控制工作提供参考，从而减少主要病毒病在猪群中的爆发流行。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1病料来自2006-2009年上海地区规模猪场、散养户送检的病死猪，经本中心门诊解剖采集的病死猪内脏样品。 1.1.2主要试剂猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV)荧光RT-PCR检测试剂盒购自香港基因晶片开发有限公司；猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)荧光检测试剂盒购自深圳太太基因工程有限公司、北京索奥生物制药科技有限公司。 1.2方法 1.2.1临床诊断及病料取材对送检门诊的发病猪通过询问了解饲养、防疫情况、发病病程、临床症状等，并观察病猪的外观病变；通过解剖检查各脏器的病变情况，采集病死猪的心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结等组织，对内脏组织，特别是有明显病变的内脏器管的病变部与健康部交界处组织进行可疑疫病的病原学检测。 1.2.2病料处理将每一个病例的内脏，剪碎、研磨、PBS匀浆，离心5min(5400g)，取上清用于核酸的提取。 1.2.3荧光PCR或荧光RT-PCR检测均参照试剂盒说明进行，取待检组织样品研磨后的上清液200uL，用于提取病毒的核酸，4种检测方法探针的荧光标记均为FAM，判定临界点也均为Ct值等于37，Ct<37判为阳性，如果37≤Ct≤40判为可疑，建议重做，Ct>40，判为阴性。 2结果 2.1临床初步诊断经询问和调查发现，大部分散养户是在临时搭建的简陋棚舍内或小屋内饲养几十至上百头猪，猪舍内外环境相对较差，卫生条件落后，营养状况参差不齐，防疫设施不全或没有，发病率一般为23%—49%，病死率为20%450%，病猪一般精神沉郁，采食量下降或无食欲，体温大部分升高，且易反复，特别是在今年4和9月，病死猪明显增加，此外有的出现神经症状、呕吐、呼吸困难、大便干燥、小便发黄、消瘦、营养不良，母猪流产或木乃伊胎。而规模化猪场相对卫生条件较好，防疫设施较规范，免疫接种等工作做得比较到位，但在引进猪只的隔离、车辆和人员进出的管理等方面仍存在漏洞，造成疫病的发生。 病死猪大体剖检病变为呼吸道充出血、喉头溃疡、间质性肺炎，消化道出血、水肿、胃底溃疡，腹股沟、肠系膜淋巴结等全身大部分淋巴结肿大、出血或坏死，脾边缘梗死、肾表面有白色坏死点，泌尿生殖道也有出血，脑膜充血、水肿等。根据临床症状及病例剖解，初步判定为疑似猪瘟、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸综合征。 2.2临床发病病例PCR检测结果2006～2009年共检测2026份临床疑似CFS、PRRS、PR、PCV2病料，2006～2009年分别为357、1050、424、375份，四种疫病检出率分别为21.01%、25.33%、31.84%、42.93%。四种疫病具体检测数据（见表1、图一）。 |
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