猪支原体肺炎的诊断及防控

猪呼吸道疾病综合征（PRDC）是当前影响猪场经济效益的主要疾病之一，猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪肺炎支原体（M.hyo）是三种主要致病原。某种程度上讲M.hyo是PRDC造成肺部损伤的核心。了解M.hyo的诊断与检测方法并科学合理的运用可指导PRDC的防控。对疫苗免疫效果的评估应注重对肺脏损伤的保护，结合实验室检测技术，综合各项数据指导实践生产。

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体（M.hyo）感染引起的一种慢性呼吸道疾病，以非持续性的干咳为主要表现，发病率高、死亡率低。因M.hyo感染造成的呼吸道黏膜屏障破坏及免疫抑制，猪群易与当地流行的其他呼吸道病原混合感染俗称地方流行性肺炎，广泛流行于世界各地的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）及猪流感病毒（SIV）等的参与又将疾病发展成为广为人知的猪呼吸道疾病综合征（PRDC），给世界养猪业带来巨大经济损失。

PRDC是多病原混合感染造成复杂疾病的典型代表，以PRRSV、PCV2和M.hyo为主的多种病原以猪只呼吸道为主战场，与宿主免疫系统相互作用，并在猪群中循环传播、复制，是当前猪群健康管理的头号对手。众所周知，对PRRSV、PCV2等病毒性病原，没有有效的药物；M.hyo是一类没有细胞壁、大小介于病毒和细菌之间的微生物，需要自主代谢和复制，对大环内酯类药物敏感，但由于M.hyo黏附于呼吸道气管上皮黏膜表面，难以被药物有效杀灭，猪支原体肺炎的临床症状也会随着脉冲式用药反复发生。PCV2和M.hyo商品疫苗已经广泛使用并得到了认可。PRRSV复杂、多变，但疫苗的使用在降低感染猪只病毒血症方面的效果也获得了广泛认可。在生产实践中，面对PRDC的复杂局面，针对3种主要病原免疫效果的评价呈现出PCV2的免疫效果最被认可、M.hyo的免疫效果不明显以及PRRSV疫苗免疫效果喜忧参半甚至忧大于喜的情况。以M.hyo疫苗最为突出，自20世纪90年代在国内外推广上市以来，一直没有找到被临床一线人员广泛接受的、可重复性好的免疫评价方案。但在PRDC的防控中，某种程度上讲M.hyo的防控是核心，是降低肺部炎症损伤的基础。了解M.hyo作为单纯致病原和混合感染在疾病中的作用，科学合理使用各种检测技术指导疾病防控和疫苗免疫，将有助于解答PRDC 防控中的疑惑。

1、M.hyo的分离培养

从发病猪群中分离培养病原是所有传染病诊断的黄金标准，猪支原体肺炎的诊断也不例外。因M.hyo生长营养要求高，早期的病原培养主要采用原代肺脏组织块进行，即使开发出人工培养基也需要添加无抗体的猪血清来提高效率，增加了操作难度和成本。菌种分离、接种成功后，在培养基中繁殖到可供检测评估的含量需要4～8周的时间，限制了该方法的临床使用。支原体属在环境和健康猪体中还存在大量不致病的猪絮状支原体和致关节炎等疾病的猪滑液支原体，在分离培养过程中，这些不相关支原体的存在会与M.hyo竞争营养，严重降低分离成功率。综上所述，传统的病原分离培养虽然是疾病诊断的黄金标准，但对于猪支原体肺炎的诊断而言，病原分离培养技术并不适合临床诊断用。对于耐药性研究、疫苗种毒选育和不同毒株致病机理等长期投入的研究是不可或缺的。生产实践中分离田间野毒株，加强后备母猪的驯化，在获得纯化的毒株后也更容易落实。

2、PCR检测技术

PCR检测技术是常用的微量、快速、灵敏度高、特异性强的病原检测方法。在针对M.hyo的检测中，为了区分同源性高的支原体属病原的干扰还可以设计巢式PCR检测，准确率更高。采样部位的选择对M.hyo阳性猪只的检测灵敏度也很重要，研究证实鼻拭子的检测准确率低于气管拭子，更低于气管支气管灌洗液的检测准确率。但后两者采样要求高，在一定程度上限制了这类方法的推广使用。PCR检测克服了病原分离培养的弊端，虽然成本偏高也不太适用于大规模检测评估，但在获取相对准确的流行病学数据方面更快更可靠。

Pieters通过给易感猪只攻毒，采用PCR技术检测猪只气管M.hyo的带毒情况，跟踪攻毒猪只的排毒时间证实，所有攻毒猪只在攻毒94d后PCR检测M.hyo的核酸100%阳性，攻毒214d后猪只PCR检测阳性率下降为61%，攻毒254d后所有猪只气管已经检测不到M.hyo核酸，这表明自然感染M.hyo野毒的猪只个体可维持带毒排毒至少254d。继而跟踪监测与攻毒猪只混养的哨兵猪只的气管带毒情况，发现在感染后8～200d的时间里，攻毒猪只都可以向体外排毒，感染其他易感猪只，这为生产过程中对后备猪群采取M.hyo的驯化并建立阴性猪群提供了理论依据。将引入的所有后备母猪人为暴露于M.hyo野毒阳性环境里，确认所有猪只感染后闭群管理，在分娩前254d时间里保持不再接触其他毒株，分娩后便可以获得M.hyo阴性的仔猪。

Giacomini通过跟踪PCR跟踪监测意大利66个牧场，不同生产模式下猪群M.hyo的气管拭子病原检测阳性率，发现猪群中M.hyo的感染状态主要受猪群猪只日龄和生产模式的影响。相同生产模式下日龄越大，猪气管拭子中M.hyo的核酸检出率越高；不同生产模式下，单点式生产比多点式生产的猪只气管拭子中M.hyo核酸的检出率高；而且单点式生产模式相比多点式生产更容易发生早期感染，病原的传播流行速度也相对更快。说明M.hyo在猪群中的传播主要依靠不同日龄猪只的接触和易感猪群间的水平传播进行。

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