禽白血病的诊断与防控

3.2 病理变化

禽白血病引起的肿瘤多种多样，肝、脾和法氏囊肉眼可见有肿瘤，大小不一，组织学观察多为灶性和中心性，主要由淋巴样瘤细胞构成，胞质内富含大量的RNA，经甲基绿哌咯咛染色呈红色。在各种年龄鸡的皮肤和内脏器官中大多可见血管瘤，充满血液的腔隙内排列着内皮细胞或其它细胞。在肝脾肿大破裂的病例里，可以看出ALV-J与REV共感染的病理现象。

淋巴细胞性白血病表现为肝脏弥漫性肿大，表面有大小不一的结节样肿瘤；脾脏肿大，表面有灰白色肿瘤结节；此外，心脏、肾脏、肺、骨髓和肠系膜也有肿瘤；淋巴肉瘤表面光滑，质地柔软，切面呈灰白色或乳白色。成红细胞性白血病较少见，肉眼观察到脾、肝、肾呈弥漫性肿大，樱桃红色，部分切面可见灰白色肿瘤结节；肌肉、内脏、皮下可见点状出血。成髓细胞性白血病很少自然发生，一般只发生于成年鸡，毛囊因血液凝固不良而出血、贫血、消瘦，肝脏偶尔见肿瘤结节。骨髓细胞瘤病自然病例极少见，髓细胞瘤常发生于胸骨表面、肋骨软骨结合处，肿瘤呈结节状。

4 诊断技术

4.1 病原检测

4.1.1 抗原检测

应用ELISA、胶体金或者磁微粒化学发光等方法可以检测不同样品中的禽白血病p27抗原，适用检测胎粪、蛋清、肛门拭子、精液、细胞培养物等样品。种鸡净化过程中常通过采集出壳雏鸡的胎粪或种鸡产蛋期的蛋清鉴定种鸡是否感染ALV。抗原检测方法简单，耗时较短，适用于大批量检测，但缺点是不能区别内源性和外源性抗原。

4.1.2 病毒分离

将不同样品接种细胞后经过一定时间或传代培养后检测病毒，其适用样品是抗凝血、蛋清、精液、临床组织研磨过滤液等。它是国际金标准，DF-1细胞和CEF细胞均可适于白血病病毒的培养，但是从控制和鉴别内外源的角度来说，DF-1细胞是其中最好的。由于DF-1细胞只适用于外源性ALV的生长，接种样品之后的细胞上清若用p27抗原检测为阳性，即可判定是有外源性白血病病毒感染。病毒分离方法特异性灵敏度均较高，结果比较准确，可分离和保存流行株并鉴定其亚群，如有需要还可进一步做致病性试验。但该方法成本高、周期长、对技术要求高，很多养殖场不易掌握或操作不稳定，需要安排专门人员长期训练。在病毒样品接种时，细胞密度过大会影响病毒增殖，因此需要注意这一点；抗凝剂应选择肝素钠或肝素锂，其中肝素锂对病毒的保护率最高；病毒样品在细胞上的维持时间越长越好。

4.1.3 核酸检测

经过特定引物扩增后对片段进行测序并与各参考毒株进行比对以确定感染亚群，所有可用于直接提取高质量核酸的样品或细胞培养物均可。核酸检测方法简单，耗时较短，可适用于大批量检测，缺点是不能区别内源性和外源性ALV核酸，容易引起误判。该方法常被用于分离病毒后的测序与病毒亚群确定；个别疑似阳性样品的初筛以及科学研究中阳性样品的定量分析，但此方法不可以作为确诊的唯一判定依据。

4.2 抗体检测

4.2.1 ELISA检测

应用商品化抗体试剂盒或自包被试剂盒检测J亚型或者其它亚型抗体，需要注意的是不同日龄不同品系鸡的血清检测结果差异较大。该方法操作简单、耗时较短，可用于批量检测，但不能确定鸡群是否处于感染状态，有些内源性蛋白的表达也可以诱导产生非感染抗体。它常被用于对现行SPF鸡洁净度标准评估、现行兽药典疫苗外源病毒检测与评估、对鸡群感染状态的总体评估与大体判定，以及在进出口检疫中作为部分的参考指标。

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