一例纯种马阴茎鳞状细胞癌伴全身转移病例报告（图）

参考文献中的方法，通过PCR检测经福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的样本中EcPV2的DNA。使用QIAamp DNA FFPE组织试剂盒（美国Qiagen）从80µm切片中提取阴茎组织（包括鳞状乳头状瘤、内翻性乳头状瘤和原位癌病变）和网膜（包括转移性SCC病变）的DNA，并以此作为PCR模板。靶向L1基因的引物组为(正向：5‘-GAG CTG TGC AGT GTC ACG TT-3’，反向：5‘-TCT CCT GGA CAA GCC ACT CT-3’)，靶向E1基因引物组为(正向：5‘-ATT ACC GCA GAG CGG AGA TG-3‘，和反向：5‘-GCT GGA CTT GCC AGT GTTTG-3‘)，预期产物大小分别为294bp和224bp。为验证所提取的DNA的质量，靶向甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因(GenBank登录号AF157626)的引物组分别为正向(5’-GAT GCC CCA ATG TTT GTG A-3‘)和反向(5’-AAG CAG GGA TGA TGT TCT GG-3‘)。循环条件：在94℃下5分钟进行初始变性。94℃下进行35次30 s的变性循环。在不同温度下退火1分钟（60℃用于靶向EcPV2 L1基因和GAPDH基因的引物组；55.5℃用于靶向EcPV2 E1基因的引物组），并且在72℃延长分钟，最后72℃延长5分钟。PCR反应使用商业化试剂盒（OnePCR，GeneDireX，台湾）进行。PCR结果呈马EcPV2基因阴性，GAPDH基因阳性（图6）。

图6. 用于检测马乳头状瘤病毒2型DNA的聚合酶链反应产物的琼脂糖凝胶电泳图（1.5%）：从阴茎组织（包括鳞状乳头状瘤、内翻性乳头状瘤和原位癌的病变）和网膜（包括转移性SCC的病变）的FFPE样本中提取DNA；N：阴性对照；L100:100bp梯度标志物（Star-100 bp DNA Ladder, OneStar, Taiwan）。

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