牧医图谱

一例纯种马阴茎鳞状细胞癌伴全身转移病例报告(图)

日期:09-20 作者:李文达- 小 + 大

参考文献中的方法,通过PCR检测经福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)的样本中EcPV2的DNA。使用QIAamp DNA FFPE组织试剂盒(美国Qiagen)从80µm切片中提取阴茎组织(包括鳞状乳头状瘤、内翻性乳头状瘤和原位癌病变)和网膜(包括转移性SCC病变)的DNA,并以此作为PCR模板。靶向L1基因的引物组为(正向:5‘-GAG CTG TGC AGT GTC ACG TT-3’,反向:5‘-TCT CCT GGA CAA GCC ACT CT-3’),靶向E1基因引物组为(正向:5‘-ATT ACC GCA GAG CGG AGA TG-3‘,和反向:5‘-GCT GGA CTT GCC AGT GTTTG-3‘),预期产物大小分别为294bp和224bp。为验证所提取的DNA的质量,靶向甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因(GenBank登录号AF157626)的引物组分别为正向(5’-GAT GCC CCA ATG TTT GTG A-3‘)和反向(5’-AAG CAG GGA TGA TGT TCT GG-3‘)。循环条件:在94℃下5分钟进行初始变性。94℃下进行35次30 s的变性循环。在不同温度下退火1分钟(60℃用于靶向EcPV2 L1基因和GAPDH基因的引物组;55.5℃用于靶向EcPV2 E1基因的引物组),并且在72℃延长分钟,最后72℃延长5分钟。PCR反应使用商业化试剂盒(OnePCR,GeneDireX,台湾)进行。PCR结果呈马EcPV2基因阴性,GAPDH基因阳性(图6)。

图6. 用于检测马乳头状瘤病毒2型DNA的聚合酶链反应产物的琼脂糖凝胶电泳图(1.5%):从阴茎组织(包括鳞状乳头状瘤、内翻性乳头状瘤和原位癌的病变)和网膜(包括转移性SCC的病变)的FFPE样本中提取DNA;N:阴性对照;L100:100bp梯度标志物(Star-100 bp DNA Ladder, OneStar, Taiwan)。

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