猪精不同冻融方法效果对比

由表2可知，熏蒸冷冻组解冻后精子活力（65.961±7.733）与程序冷冻组（70.100±8.755）差异不显著（P＞0.05）；解冻后前向精子占比两组之间也没有显著差异（P＞0.05），但程序冷冻组在数值上偏高。

批量解冻不同数量冻精细管，精子活力和前向精子结果如表3。

由表3可知，解冻后精子活力方面，T3组精子活力（70.038±14.458）显著高于T9组（57.485±9.321）（P＜0.05），但是T3组和T9组分别与其余各组在解冻后精子活力上差异不显著（P＞0.05）；解冻后前向精子方面，T1组（36.062±11.326）、T3组（38.308±11.547）、T5组（36.600±10.204）均显著高于T9组（23.738±7.689）（P＜0.05），但与其余组之间均没有显著差异（P＞0.05），T9组与T2、T4、T6、T7、T8组之间差异不显著（P＞0.05）。

3 熏蒸冷冻与程序冷冻对复苏后精子活力和前向精子的影响

目前国内外精液冷冻主要采取两种方法，即熏蒸法和程序冷冻法，两种方法在不同动物上均已广泛使用。众所周知，精子在冷冻过程中面临着冰晶、渗透压及活性氧（ROS）的威胁，以一定的降温速率来冷冻精子，使其安全通过危险区对精子冷冻至关重要。研究表明，冷冻过程中水分子玻璃化状态下最有利于精子保存，对精子的理化损伤最小。熏蒸法冷冻虽然也取得了一些良好的冷冻效果，但由于其客观因素影响较大，其对降温速率主观干预性较差，而程序冷冻可以做到对冷冻曲线实时监控，人为主观调控力强，使实际降温速率最大限度地按照设定的速率进行，保证降温速率稳定进行，理论上可以增加不同批次间冷冻效果的稳定性。虽然实验1复苏后的精子活力和前向精子占比在统计学上无显著差异，但在数值上程序冷冻要优于熏蒸冷冻，目前很多学者都进行过精液不同方法的冷冻研究。

4 批量解冻与单支解冻对复苏后精子活力和前向精子的影响

众所周知，冻精解冻过程中的冷冻损伤是不可避免的，如何更好地优化解冻程序，增加解冻后精子的存活率是目前冻精应用研究的方向之一。根据猪场实际需求，方便猪冻精在人工授精中的操作性，提高使用效率，特进行了0.5mL冻精的批量解冻实验，根据实验结果，同时解冻8支0.5mL公猪冻精与单支解冻后在精子活力和前向精子占比上均没有显著差异（P＞0.05）；当同时解冻9支时，解冻后精子活力和前向精子占比显著低于单支解冻（P＜0.05），其原因可能是由于放入水浴中的冷源过多，超过最佳升温速率的上限，无法快速通过-30℃～70℃危险区，造成精子损伤比例偏大所致。据相关报道，精子的冻融弹性因其品种品系、精子大小形状及脂质含量等特性而有所不同，所以导致冷冻和解冻程序也不尽相同。研究人员在众多物种上都在进行冷冻子的研究，解冻的程序也不尽相同，本次0.5mL批量解冻实验可以为优化公猪冻精推广使用方案提供一定的数据支持，有利于当前环境下优秀公猪基因的传播。

5 结论

结论1：使用熏蒸冷冻（距液氮面3cm，熏蒸8min）和程序冷冻（使用本文降温曲线进行冷冻）公猪精液在解冻后精子活力和前向精子占比两个指标上没有显著差异。

结论2：50℃ 16s水浴一次性批量解冻8支以内（含8支）0.5mL冻精细管，解冻后精子活力和前向精子占比与单支解冻均没有显著差异，本实验对猪冻精解冻方法的研究，可为优化冻精在猪场应用提供一定的数据支撑。

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