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qPCR常见问题及解决方案(图)

日期:05-08 作者:佚名- 小 + 大

1)反应体系污染,结合NTC和NRC结果确认污染情况,建议从水,引物,酶和环境等逐一排除污染。

2)试剂暴露在强光或高温下导致试剂失效,建议用新的试剂做对比实验。

3)仪器长时间未校准,建议定期进行仪器校准保养。

4)耗材与仪器不匹配,需确认对应仪器对耗材的要求。

5.有扩增曲线,无熔解曲线

可能是熔解程序设置错误,未搜集荧光信号,建议重新实验,增加熔解曲线阶段的信号搜集。

6.两种试剂平行对比,同一产物Tm值不同

可能是不同试剂的促解链成分或含量不一样,导致同一产物解链温度Tm值不一样。

7.熔解曲线前端起杂峰

可能是ROX浓度与机型不匹配,建议取消ROX校正查看熔解曲线是否正常,调整后如下图。

【注】可以在仪器上将参比染料设置由ROX更改为NONE,取消ROX的校正功能,查看熔解曲线是否恢复正常,即可判定是否是ROX导致的。

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