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qPCR常见问题及解决方案(图)

日期:05-08 作者:佚名- 小 + 大

②有Ct值且<35,表示反应体系被污染,可逐步排除污染源。

2)NRC有扩增

NTC正常,NRC有Ct值,可能是RNA含有gDNA污染。建议用DNase I消化或使用含有gDNA去除的反转录试剂盒(如Cat NO.11141ES)。

【注】NTC是指将H2O代替模板的阴性对照反应;NRC是指将未反转录的RNA作为模板的阴性对照反应。

9.复孔重复性差

1)加样误差导致,建议移液器定期校准,另外可通过扩大反应体系或提前配制好预混液优化。

2)模板量低,建议提高模板量,使Ct值落在15-30之间。

3)仪器长时间未校准,建议定期进行仪器校准保养。

二、熔解曲线异常

熔解曲线常用来判断qPCR结果的特异性,理想的熔解曲线为单峰,异常的熔解曲线可能会出现双峰、杂乱等情况,下面我们来逐一分析。

1.熔解曲线出现双峰

1)双峰,杂峰Tm在80℃之前

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