qPCR常见问题及解决方案（图）

一、扩增曲线异常

正常的扩增曲线一般呈S型，Ct值最好在20-30之间。异常的扩增曲线包括Ct值偏大、无平台期、平台期下降等问题。

1.Ct值偏大（如Ct值＞30）

1）模板量低或基因表达丰度低，建议增加模板量观察Ct值能否成相应倍数减少。

2）qPCR整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低，建议通过标准曲线确认扩增效率。

3）扩增产物过长，建议用三步法程序扩增或优化引物，扩增产物长度最好不超过300bp。

4）体系中可能存在抑制剂影响酶的活性，建议梯度稀释模板或重新制备纯度更高的模板。

2.扩增曲线无法达到平台期

基因丰度低、循环数较少，建议增加循环数或选择适合低丰度基因定量的产品。

3. 扩增曲线平台期下降

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