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4.3 仪器和设备
4.3.1 液相色谱-串联质谱仪（配电喷雾离子源）或相当者
4.3.2 实验室常规仪器设备
4.3.3 天平 感量0.01g
4.3.4 分析天平 感量0.00001g
4.3.5 漩涡混合仪
4.3.6 振荡器
4.3.7 组织匀浆机
4.3.8 冷冻离心机
4.3.9 固相萃取装置
4.3.10 旋转蒸发仪
4.3.11 氮吹仪
4.3.12 离心管 50mL、20mL
4.3.13 微孔滤膜 0.22μm
4.4 测定步骤
4.4.1 试料的制备
试料的制备包括：
——取冷冻样品于室温解冻，将解冻后的样品于-8℃，6000r/min离心20min，作为供试样品。
——取冷冻空白样品于室温解冻，将解冻后的空白样品于-8℃，6000r/min离心20min，作为空白样品。
—— 取空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加样品。
4.4.2 提取
取10.0mL供试样品，置50mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯提取，震荡15min，以6000r/min离心10min，将乙酸乙酯层移至鸡心瓶中。再加20mL乙酸乙酯同法操作，合并两次乙酸乙酯提取液至鸡心瓶中，于45℃水浴中减压旋转蒸发至干。
4.4.3 净化
加10mL 4%氯化钠溶液于鸡心瓶中，充分旋涡溶解残留物，加5mL正己烷振荡混合1min，静置分层，弃去正己烷。再加5mL正己烷，同法操作。水层为样品备用液。
用5mL甲醇、5mL水淋洗活化C18柱，弃掉洗涤液。取上述水层备用液，以每3～4秒1滴的流速通过预处理后的C18柱，用5mL水洗柱，弃去洗液，抽干。用5mL甲醇洗脱并收集洗脱液，氮气吹干，用1mL50%乙腈溶解残余物，充分涡旋，用0.22μm滤膜过滤，滤液供高效液相色谱-串联质谱仪测定。
4.4.4 标准曲线的制备
准确量取适宜浓度的氯霉素标准容液，添加到通过提取、净化后的空白样品洗脱液中，用氮气吹干，用1mL50%乙腈溶解残余物，充分涡旋，用0.22um滤膜过滤，制得浓度为0.20μg/L、0.50μg/L 、1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L的系列标准工作溶液，供高效液相色谱-串联质谱仪测定。
4.4.5 测定
4.4.5.1 液相色谱条件
色谱仪：Waters_2695高效液相色谱仪或相当者
色谱柱：AtlantisTM C18 (2.1mm×150mm，5μm) 或相当者
柱温：30℃
流速：0.2mL/min
进样量：20μL
运行时间：15min
流动相：A：乙腈，B，水
GradienTable Time(min) Flow Rate(mL/min) A(%) B(%) Curve
Initial 0.2 20 80 1
6 0.2 90 10 6
8 0.2 90 10 6
15 0.2 20 80 1
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