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5.4 0.5Mol/L氯化钠溶液 取氯化钠2.9g，加水至100ml 5.5 乙腈-水溶液（84+16） 5.6 氯霉素检测试剂盒 5.6.1 氯霉素系列标准溶液 0µg/L、0.1µg/L、0.3µg/L、0.9µg/L、2.7µg/L、8.1µg/L 5.6.2 酶标板 8条×12孔，包被有偶联抗原 5.6.3 氯霉素特异性抗体 5.6.4 酶标记物 5.6.5 浓缩复溶液 5.6.6 洗涤液 5.6.7 底物溶液A、B 5.6.8 终止液 6 测定步骤 6.1 试样的制备 取匀浆后的供试样品，作为供试试样。 6.2 试样提取和纯化 称取(5±0.01g)匀浆物置离心管中，加入15ml乙腈-水溶液（84+16），混合，剧烈振荡10min。15℃，3000r/min离心10min。取3ml上清液，加入1ml0.5Mol/L氯化钠溶液和3ml乙酸乙酯，混合振荡10min，静置分层。将上层液移入另一管中用氮气吹干(或鸡心瓶中50℃减压蒸干)。用1ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，加入异辛烷1ml振荡5min。15℃，3000r/min离心5min，除去上层液。取50ml水相供ELISA测定。 6.3 试样测定（20℃～24℃条件下操作） 6.3.1 使用前将试剂盒置于室温（20~24℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中，将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品均需做两个平行实验。 6.3.2 加入50 mL标准溶液或试样溶液到微孔底部，再加入50 ml氯霉素特异性抗体工作液，用盖板膜封板，37℃恒温箱中反应30min。 6.3.3 倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，去除孔中液体。每孔加入250ml洗涤液，30s后倒出孔中液体，在吸水纸上拍干，如此重复操作共洗板5次。 6.3.4 加入100ml酶标记物到微孔底部，用盖板膜封板，37℃恒温箱中反应30min。取出酶标板，如前述洗板5次。 6.3.5 加入50mL底物液A、50mL底物液B到微孔中，轻轻振荡混匀，37℃恒温箱避光显色15min。 6.3.6 加入50ml终止液到微孔中，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（OD值）。 7 结果判定 所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准（0标准）吸光度值的平均值再乘以100%，得到以百分比给出的吸光度值，以式（1.1）表示： 百分吸光度值= B ×100% ………………………………………（1.1） B0 式中: B－为标准溶液或样品的平均吸光度值。 B0－为0浓度的标准溶液平均吸光度值。 以X轴为标准溶液中氯霉素浓度(ng/mL)的自然对数，Y轴为百分吸光度值，在半对数坐标纸上绘制标准曲线图。相对应的供试样品的浓度（ng/mL）可以从标准曲线上查出。也可以求出回归曲线的方程，计算未知样品中氯霉素的浓度。如果有专业计算机软件可直接求出供试样中氯霉素的浓度。 注：检测结果小于0.3μg/ kg时，可判为阴性，大于0.3μg/ kg时，判为可疑，需用确证法确认。
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