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鸡蛋中氯霉素残留检测方法

日期:06-16 作者:阳光网站- 小 + 大

5.4  0.5Mol/L氯化钠溶液  取氯化钠2.9g,加水至100ml

5.5  乙腈-水溶液(84+16

5.6 氯霉素检测试剂盒   

5.6.1  氯霉素系列标准溶液    0µg/L0.1µg/L0.3µg/L0.9µg/L2.7µg/L8.1µg/L

5.6.2  酶标板    8×12孔,包被有偶联抗原

5.6.3  氯霉素特异性抗体

5.6.4  酶标记物

5.6.5  浓缩复溶液

5.6.6  洗涤液

5.6.7  底物溶液AB

5.6.8  终止液

 

6  测定步骤

 

6.1 试样的制备

取匀浆后的供试样品,作为供试试样。

6.2 试样提取和纯化

称取(5±0.01g)匀浆物置离心管中,加入15ml乙腈-水溶液(84+16),混合,剧烈振荡10min153000r/min离心10min。取3ml上清液,加入1ml0.5Mol/L氯化钠溶液和3ml乙酸乙酯,混合振荡10min,静置分层。将上层液移入另一管中用氮气吹干(或鸡心瓶中50减压蒸干)。用1ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物,加入异辛烷1ml振荡5min153000r/min离心5min,除去上层液。取50ml水相供ELISA测定。

6.3 试样测定2024条件下操作

6.3.1  使用前将试剂盒置于室温(20~24)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中,将样品和标准品对应微孔按序编号,每个样品和标准品均需做两个平行实验。

6.3.2  加入50 mL标准溶液或试样溶液到微孔底部,再加入50 ml氯霉素特异性抗体工作液,用盖板膜封板,37恒温箱中反应30min

6.3.3  倒出孔中液体,将酶标板倒置在吸水纸上拍打,去除孔中液体。每孔加入250ml洗涤液,30s后倒出孔中液体,在吸水纸上拍干,如此重复操作共洗板5次。

6.3.4  加入100ml酶标记物到微孔底部,用盖板膜封板,37恒温箱中反应30min。取出酶标板,如前述洗板5次。

6.3.5  加入50mL底物液A50mL底物液B到微孔中,轻轻振荡混匀,37恒温箱避光显色15min

6.3.6  加入50ml终止液到微孔中,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(OD值)。

 

7 结果判定

 

所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准(0标准)吸光度值的平均值再乘以100%,得到以百分比给出的吸光度值,以式(1.1)表示:

百分吸光度值=   B   ×100%  ………………………………………1.1

B0    

式中:

   B-为标准溶液或样品的平均吸光度值。

B0-为0浓度的标准溶液平均吸光度值。

X轴为标准溶液中氯霉素浓度(ng/mL)的自然对数,Y轴为百分吸光度值,在半对数坐标纸上绘制标准曲线图。相对应的供试样品的浓度(ng/mL)可以从标准曲线上查出。也可以求出回归曲线的方程,计算未知样品中氯霉素的浓度。如果有专业计算机软件可直接求出供试样中氯霉素的浓度。

注:检测结果小于0.3μg/ kg时,可判为阴性,大于0.3μg/ kg时,判为可疑,需用确证法确认。

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