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鸡蛋中磺胺二甲嘧啶残留检测方法

日期:06-16 作者:阳光网站- 小 + 大

5.4.1  磺胺二甲嘧啶系列标准溶液  0mg/L 1mg/L3mg/L9mg/L27mg/L81mg/L

5.4.2  酶标板  8×12孔,包被有偶联抗原

5.4.3  过氧化物酶标记物

5.4.4  磺胺二甲嘧啶(SM2)抗体

5.4.5  底物液A

5.4.6  底物液B

5.4.7  浓缩洗涤液

5.4.8  浓缩复溶液  

5.4.9  终止溶液

 

6  测定步骤

 

6.1  试样的制备

取匀浆后的供试样品,作为供试试样。

6.2  试样提取和纯化

称取(5±0.01)g样品于50ml离心管中。加入乙腈-水溶液(84+16)15ml混合,剧烈振荡10min153000r/min离心10min。取3ml上清液,加入2ml水和3ml乙酸乙酯,混合振荡10min,静置分层。将上层液移入另一离心管中,氮气吹干。用1 ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物,加入异辛烷1 ml,振荡5min153000r/min离心5min,除去上层液。取50μl水相ELISA测定。

6.3  试样测定(2024条件下操作)

6.3.1  使用前将试剂盒置于室温(20~24)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中,样品和标准品均做平行实验。

6.3.2  加入50 mL标准溶液或试样溶液到微孔底部,再加入50 ml磺胺二甲嘧啶(SM2)抗体工作液,用盖板膜封板,37恒温箱中反应30min

6.3.3  倒出孔中液体,将酶标板倒置在吸水纸上拍打,去除孔中液体。每孔加入250ml洗涤液,30秒后倒出孔中液体,用吸水纸拍干,如此重复操作共洗板5次。

6.3.4  加入100ml酶标记物到微孔底部,用盖板膜封板,37恒温箱中反应30min。取出酶标板,如前述洗板5次。

6.3.5  加入50mL底物液A50mL底物液B到微孔中,轻轻振荡混匀,37恒温箱避光显色15min

6.3.6  加入50ml终止液到微孔中,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处,测定每孔吸光度值(OD值)。

 

7  结果判定

 

所获得的标准或样品吸光度值的平均值除以第一个标准(0标准)吸光度值的平均值再乘以100%,得到以百分比给出的吸光度值,以式(1.1)表示:

 

百分吸光度值=   B   ×100%  ………………………………………………………1.1

B0    

 

式中:

B—为标准溶液或供试样品的平均吸光度值;

B0—为零浓度标准溶液的平均吸光度值。

X轴为标准溶液中磺胺二甲嘧啶浓度(ng/mL)的自然对数,Y轴为百分吸光度值,在半对数坐标纸上绘制标准曲线图。相对应的供试样品的浓度(ng/mL)可以从标准曲线上查出。也可以求出回归曲线的方程,计算未知样品中磺胺二甲嘧啶的浓度。如果有专业计算机软件可直接求出供试样中磺胺二甲嘧啶的浓度。

注:检测结果小于3.0μg/ kg时,可判为阴性,大于3.0μg/ kg时,判为可疑,需用确证法确认。

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