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5.4.1 磺胺二甲嘧啶系列标准溶液 0mg/L 、1mg/L、3mg/L、9mg/L、27mg/L、81mg/L 5.4.2 酶标板 8条×12孔，包被有偶联抗原 5.4.3 过氧化物酶标记物 5.4.4 磺胺二甲嘧啶(SM2)抗体 5.4.5 底物液A 5.4.6 底物液B 5.4.7 浓缩洗涤液 5.4.8 浓缩复溶液 5.4.9 终止溶液 6 测定步骤 6.1 试样的制备 取匀浆后的供试样品，作为供试试样。 6.2 试样提取和纯化 称取(5±0.01)g样品于50ml离心管中。加入乙腈-水溶液(84+16)15ml混合，剧烈振荡10min。15℃，3000r/min离心10min。取3ml上清液，加入2ml水和3ml乙酸乙酯，混合振荡10min,静置分层。将上层液移入另一离心管中,氮气吹干。用1 ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，加入异辛烷1 ml，振荡5min，15℃，3000r/min离心5min，除去上层液。取50μl水相供ELISA测定。 6.3 试样测定（20℃～24℃条件下操作） 6.3.1 使用前将试剂盒置于室温（20~24℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中，样品和标准品均做平行实验。 6.3.2 加入50 mL标准溶液或试样溶液到微孔底部，再加入50 ml磺胺二甲嘧啶(SM2)抗体工作液，用盖板膜封板，37℃恒温箱中反应30min。 6.3.3 倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，去除孔中液体。每孔加入250ml洗涤液，30秒后倒出孔中液体，用吸水纸拍干，如此重复操作共洗板5次。 6.3.4 加入100ml酶标记物到微孔底部，用盖板膜封板，37℃恒温箱中反应30min。取出酶标板，如前述洗板5次。 6.3.5 加入50mL底物液A、50mL底物液B到微孔中，轻轻振荡混匀，37℃恒温箱避光显色15min。 6.3.6 加入50ml终止液到微孔中，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，测定每孔吸光度值（OD值）。 7 结果判定 所获得的标准或样品吸光度值的平均值除以第一个标准（0标准）吸光度值的平均值再乘以100%，得到以百分比给出的吸光度值，以式（1.1）表示： 百分吸光度值= B ×100% ………………………………………………………（1.1） B0 式中: B—为标准溶液或供试样品的平均吸光度值； B0—为零浓度标准溶液的平均吸光度值。 以X轴为标准溶液中磺胺二甲嘧啶浓度(ng/mL)的自然对数，Y轴为百分吸光度值，在半对数坐标纸上绘制标准曲线图。相对应的供试样品的浓度（ng/mL）可以从标准曲线上查出。也可以求出回归曲线的方程，计算未知样品中磺胺二甲嘧啶的浓度。如果有专业计算机软件可直接求出供试样中磺胺二甲嘧啶的浓度。 注：检测结果小于3.0μg/ kg时，可判为阴性，大于3.0μg/ kg时，判为可疑，需用确证法确认。
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