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动物源性食品中有害化学物质及污染物的检测——孔雀石绿

日期:10-28 作者:曲志娜 赵思俊等- 小 + 大

另取50mL离心管加入10mL乙腈,洗涤匀浆机刀头10s,洗涤液移入前一离心管中,加入3mL硼氢化钾溶液,用玻棒捣散离心管中的沉淀并搅匀,涡旋混匀器上振荡1min,静置20min,4 000r/min离心10min,上清液并入125mL分液漏斗中。

在50mL离心管中继续加入15mL盐酸羟胺溶液、2.5mL对甲苯磺酸溶液、5.0mL乙酸铵缓冲溶液,振荡2min,再加入10mL乙腈,继续振荡2min,4 000r/min离心10min,上清液并入125mL分液漏斗中,重复上述操作1次。

在分液漏斗中加入20mL二氯甲烷,具塞,剧烈振摇2min,静置分层,将下层溶液转移至250mL茄形瓶中,继续在分液漏斗中加入5mL乙腈、10mL二氯甲烷,振摇2min,把全部溶液转移至50mL离心管,4 000r/min离心10min,下层溶液合并至250mL茄形瓶,45℃旋转蒸发至近干,用2.5mL乙腈溶解残渣。

净化:将PRS柱安装在SPE装置上,上端连接酸性氧化铝SPE柱,用5mL乙腈活化,转移提取液到柱上,再用乙腈洗茄形瓶2次,每次2.5mL,依次过柱,弃去酸性氧化铝柱,吹PRS柱近干,在不抽真空的情况下,加入3mL等体积混合的乙腈和乙酸铵溶液,收集洗脱液,乙腈定容至3mL,过0.45μm滤膜后上机测定。

刘少彬等在实际检测中发现,GB/T 20361—2006中的高效液相色谱荧光检测器法存在回收率差异大、分层有时不明显,基线噪声不稳定等缺陷,针对这些问题提出了一些改进的建议。

如前所述,GB/T 20361—2006方法中是先加入10mL乙腈,提取后加入酸性氧化铝振荡离心,上清液移入分液漏斗中,在分液漏斗中加入硼氢化钾振荡。实际检测中发现,在第一步乙腈提取液中加入硼氢化钾,静置还原后接着加入酸性氧化铝,既可有效地使孔雀石绿得到充分还原,而且又可以有效地去除大分子脂肪和促进层析。这就减少了加乙腈提取后在分液漏斗中加硼氢化钾振荡还原这一步,既缩短了检测时间又减少了乙腈的试剂用量,依然保证了较高回收率。

GB/T 20361—2006中是直接加入20mL二氯甲烷来进行萃取,但分层缓慢,且会出现有几层有时忽上忽下的现象,如果样品油脂含量较高,容易出现乳化现象。若在分液漏斗中先加入10mL水,加入少量氯化钠,改进方法的回收率及精确度试验分层明显。原因是加入水可洗去萃取液中水溶性杂质,利于分层,而少量氯化钠可防止大面积乳化现象发生。

净化过程中,在移除酸性氧化铝柱后,建议比GB/T20361—2006多加一步骤,用3mL水淋洗PRS柱。结果表明,加水淋洗PRS柱可有效去除停留在PRS上的水溶性杂质而又不影响待测物孔雀石绿,有效降低基线噪声,大大提高回收率。

杨贤庆等在实际检测中发现,GB/T 20361—2006中,在鱼肉前处理过程,为了将孔雀石绿完全还原,多次加入硼氢化钾,使试验操作繁琐复杂。为了确定硼氢化钾的还原效果,杨贤庆等通过试验,得出2.4μg孔雀石绿被完全还原仅需要硼氢化钾15μg,由此说明硼氢化钾的还原效果非常好,但硼氢化钾在酸性条件下反应产生氢气,所以在乙酸铵缓冲液体系下,还原效果很差。另外,如果硼氢化钾在对甲苯磺酸之后加入,硼氢化钾也会与对甲苯磺酸发生反应,因为对甲苯磺酸呈弱酸性。故采取在浓缩后加入0.1mL的硼氢化钾还原,而避免在前处理酸性环境下加入,影响其还原效果,从而避免了前处理过程中多次加入的繁琐。

6.3.3水中孔雀石绿的样品处理方法

刘桂花等建立了水中孔雀石绿和无色孔雀石绿的同位素内标稀释LC-MS/MS,方法简单,主要利用离子交换柱高度富集浓缩水中待测物,水样中加入氘代同位素内标,经SCX柱提取和净化。

样品处理:量取100mL鱼池水样加入50μL浓度为100ng/mL的混合内标,转移至先用5mL乙酸-乙腈(5∶95,V/V)溶液活化过的AgilentSCXSPE小柱上,以流速1~3mL/min过柱。待水样全部过完柱后依次用25mL丙酮、5mL甲醇和5mL乙腈淋洗。用10mL氨水-乙腈(5∶95,V/V)溶液洗脱小柱,收集洗脱液在40℃下用氮气吹至0.5mL,加入0.5mL 2mmol/L乙酸铵溶液,涡旋混匀15s,过0.45μm有机系微孔滤膜备用。

7、检测方法

根据目前各类检测方法的不同检测原理,分为化学分析法和免疫化学法两大类。

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