动物源性食品中有害化学物质及污染物的检测——孔雀石绿

样品处理过程复杂，步骤较多，其中重要一环是SPE。SPE的基本原理与液相色谱分离机理相似系根据被萃取组分与样品基质及其他成分在固定相填料上作用力强弱的不同而使它们彼此分离。而SPE主要是依靠SPE柱来纯化，不同的SPE柱的回收率差别较大。对孔雀石绿及无色孔雀石绿的净化主要有阳离子交换柱、氧化铝柱等，目前研究方法中基本使用阳离子交换柱进行净化。Bergwerff等对不同规格不同品牌的阳离子交换柱进行比较试验，试验结果显示Aromatic sulfonicacid柱及Sulfonic acid柱（均来自Baker），SCX柱（来自IST），SCX柱（来自Varian）这四种柱子对孔雀石绿回收率范围在33%~54.6%，对无色孔雀石绿回收率均超过91%，而SupelcleanLC-SCX（来自Supelco）、SCX（来自Merck）这两种柱子对孔雀石绿和无色孔雀石绿的回收率都非常低，基本不保留。张志刚等使用OasisMCX柱对孔雀石绿回收率超过83%，对无色孔雀石绿回收率超过78%，并且净化效果较好。吴学立选择了OasisMCX以及OasisWCX阳离子交换柱这两种适应碱性化合物净化的SPE柱来进行净化试验。结果显示MCX柱对孔雀石绿和无色孔雀石绿有非常好的保留，并且回收率都超过91.4%，而WCX柱对孔雀石绿保留较差，回收率低，对无色孔雀石绿保留较好。

邱绪建用国产732阳离子树脂、硅胶和PRS（丙基磺酸型阳离子树脂）分别进行试验。结果发现国产732阳离子树脂虽然可吸附孔雀石绿，但无法将其洗脱，1mol/L氯化钠溶液、100%甲醇、乙腈均不能使其洗脱。采用硅胶虽然可以吸附孔雀石绿并使其洗脱，但是回收率太低，小于50%。对于无色孔雀石绿，硅胶不能吸附无色孔雀石绿；采用国产阳离子树脂，无色孔雀石绿的回收率太低。

PRS是一种较好的树脂，能吸附和解析所检物质，经试验发现回收率较高而且纯化效果好。Thompson等和Plakas等均采用丙基磺酸型的SPE柱来纯化。

6.3几种样品处理方法

6.3.1 水产品中孔雀石绿残留量的测定（GB/T19857—2005）

6.3.1.1鲜活水产品

提取：称取5.00g已捣碎样品于50mL离心管中，加入200μL混合内标标准溶液，加入11mL乙腈，超声波振荡提取2 min，8 000r/min匀浆提取30s，4 000r/min离心5min，上清液转移至25mL比色管中；另取一50mL离心管加入11mL乙腈，洗涤匀浆刀头10s，洗涤液移入前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，涡旋混匀器上振荡30s，超声波振荡5min，4 000r/min离心5min，上清液合并至25mL比色管中，用乙腈定容至25.0mL，摇匀备用。

净化：移取5.00mL样品溶液加至已活化的中性氧化铝柱上，用KD浓缩瓶接收流出液，4mL乙腈洗涤中性氧化铝柱，收集全部流出液，45℃旋转蒸发至约1mL，残液用乙腈定容至100mL，超声振荡5min，加入1.0mL5mmol/L乙酸铵，超声振荡1min，样液经0.2m滤膜过滤后上机测定。

6.3.1.2 加工水产品

提取：称取5.00g已捣碎样品于100mL离心管中，加入200μL混合内标标准溶液，依次加入1mL盐酸羟胺、2mL对甲苯磺酸、2mL乙酸铵缓冲溶液和40mL乙腈，匀浆2min（10 000r/min），离心3min（3 000r/min），将上清液转移到250mL分液漏斗中，用20mL乙腈重复提取残渣1次，合并上清液。于分液漏斗中加入30mL二氯甲烷、35mL水，振摇2min，静置分层，收集下层有机层于150mL梨形瓶中，再用20mL二氯甲烷萃取1次，合并二氯甲烷层，45℃旋转蒸发近干。

净化：将中性氧化铝柱串联在阳离子交换柱上方。用6mL乙腈分3次（每次2mL），用涡旋振荡器涡旋溶解上述提取物，并依次过柱，控制阳离子交换柱流速不超过0.6mL/min，再用2mL乙腈淋洗中性氧化铝柱后，弃去中性氧化铝柱。依次用3mL2%（V/V）甲酸溶液、3mL乙腈淋洗阳离子交换柱，弃去流出液。用4mL5%（V/V）乙酸铵甲醇溶液洗脱，洗脱流速为1mL/min，用10mL刻度试管收集洗脱液，用水定容至10.0mL，样液经0.2μm滤膜过滤后上机测定。

6.3.2水产品中孔雀石绿残留量的测定———高效液相色谱荧光检测法（GB/T 20361—2006）

提取：称取5.00g样品于50mL离心管内，加入10mL乙腈，10 000r/min匀浆提取30s，加入5g酸性氧化铝，振荡2min，4 000r/min离心10min，上清液转移至125mL分液漏斗中，在分液漏斗中加入2mL二甘醇、3mL硼氢化钾溶液，振摇2min。

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