动物源性食品中有害化学物质及污染物的检测——孔雀石绿

7.1.7.4串联四极杆质谱

该方法是国家标准的检测方法，也是目前各国进出口检验部门普遍采用的检测方法。应用三重四极杆MRM定量分析的功能：第一级四极杆挑选出监测离子，第二级四极杆进行碰撞反应，第三级四极杆挑选出2个监测离子，其中1个离子用于定量、1个离子用于确证。该仪器通过第一级四极杆的离子选择，有效地降低了背景的干扰，极大地提高了灵敏度和定性准确性。

王鹏等采用LC-MS/MS建立水产品中孔雀石绿及其无色代谢物残留的检测方法，均质后的水产品样品用乙腈和乙酸铵缓冲液提取，合并提取液，用二氯甲烷反提取，经中性氧化铝柱和PRS柱SPE净化，不使用氧化铅柱在线氧化，色谱分离后直接进入MS/MS检测器，采用电喷雾（ESI）正离子扫描模式、MRM方式检测，外标法定量。孔雀石绿和无色孔雀石绿的检出限为0.5ng/g，线性方程的相关系数大于0.99，在添加浓度0.5~2.0ng/g范围内，孔雀石绿回收率为78.4%~92.1%，无色孔雀石绿回收率为82.4%~98.1%，相对标准偏差（RSD）均小于5.7%。刘桂华等建立了用同位素内标稀释技术测定水中孔雀石绿及其代谢物无色孔雀石绿的HPLC-MS/MS法。在水样中加入氘代同位素内标，经SCX提取和净化后，用MRM方式检测。方法的线性范围为0.2~5μg/L，孔雀石绿和无色孔雀石绿的检出限均为1μg/L，回收率为93.6%~107.5%，RSD为3.0%~9.3%。蔡泓等建立了一个简便快速的初筛方法。采用乙腈一次萃取，标准系列加入阴性样品中，与待测样品相同步骤、相同条件下操作，结果加标回收率为68.4%~108%；相对标准偏差为5.9%~10.8%，孔雀石绿及代谢物的定量限（LOQ）分别为0.50μg/kg和0.20μg/kg，检出限（LOD）分别为0.16μg/kg和0.07μg/kg。样品从前处理到测定完成只需要30~40min，节省了大量的时间、人力、物力，适用于日常的大批量样品检测。郭德华等利用HPLC-VIS和Q-TOF-MS技术分别建立了HPLC（初筛法）和HPLC-MS/MS法（确证法）两种检测方法。试样中的残留物用乙腈-乙酸盐缓冲混合液提取，用乙腈再次提取后，液-液分配到二氯甲烷层，最后用丙磺酸SPE小柱净化，洗脱液上机测定，其中的无色孔雀石绿用PbO2衍生柱还原为在可见光处可检测的孔雀石绿，外标法定量。对呈阳性的样品用HPLC与Q-ToF-MS联用进行确证。HPLC-VIS条件，色谱柱1：Kromasil KR60-5CN，150mm×4.6mm，10μm，在CN柱和检测器之间连接25% PbO2氧化柱；流动相：乙腈-乙酸盐缓冲液（55∶45，V/V）；流速：2.0mL/min；柱温：室温；检测波长：618nm；进样量：50μL。HPLC-MS/MS条件，色谱柱2：TSK-GELODS，250mm×20mm，在色谱柱和检测器之间连接25%PbO2氧化柱；流动相：0.05mol/L乙酸铵（pH4.5）-乙腈（25∶75，V/V）；流速：0.2mL/min；柱温：室温；进样量：50μL；电离方式：ESI＋；毛细管电压：2.9kV；锥体电压：55V；离子源温度：120℃；干燥温度：350℃；雾化气流量：90L/h；干燥气流量：490L/h；碰撞能量：27eV；测定方式：TOF；母离子（m/z）：329，碎片离子（m/z）：313，208。并探讨了不同参数（毛细管电压、锥体电压和碰撞电压等）对测定结果的影响。结果表明，随着毛细管电压的增大，孔雀石绿的电离急剧增大，信号响应值增加，电压达到2.9kV时达到最大值，随后趋于平缓。锥体电压的变化对孔雀石绿的响应值影响不大。碰撞能量到达27eV后，在分子离子峰[M＋]产生断裂形成特征性碎片离子基础上，响应值达到最大。

7.2免疫分析法

免疫分析法包括酶免疫检测技术（EIA）、放射免疫法（RIA）、免疫荧光技术（IFT）、免疫电镜技术（IEM）、免疫胶体金技术（ICT）等，是利用抗原与抗体间的特异性反应原理为基础来对某种物质进行定性或定量测定的一种方法。该方法特异性强、灵敏度高（检测限可达0.1ng/mL）、操作简便快捷、分析容量大、检测成本低，不需要贵重仪器，前处理过程可大大简化甚至省去，对试验人员的技术水平要求不高，尤其适宜现场筛选和大量样品的快速分析。以该方法为基础开发的一系列检测产品，如ELISA检测试剂盒、胶体金试纸条、免疫传感器等可广泛应用于现场样品和大量样品的快速检测。目前已有真菌毒素、农药残留、兽药残留等系列相关检测产品供应市场，FAO已向许多国家推荐此项方法，有人称免疫分析法是21世纪最具竞争性和挑战性的检测分析方法之一。

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