动物源性食品中细菌的检测——弯曲杆菌
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4.1.3 确定诊断 4.1.3.1 生化试验 从纯分离平板上挑取2个典型菌落，分别接种于布氏肉汤中，置微需氧条件下42℃培养24～28h。同时接种一份已知阳性培养物作为对照。继续置5%氧、85%氮、10%二氧化碳微需氧条件下做以下试验。 生长试验：接种3管含0.002%中性红（NR）的含0.18%琼脂的布氏肉汤基础培养基，其中1管置37℃培养，检查在这一温度下的生长情况，并用于观察过氧化氢酶反应。另2管分别置42℃和25℃培养，每日检查生长情况，对未生长者需培养5d，方可做出最后判断。 1%甘氨酸中生长试验：将供试培养物接种于加有NR和1%甘氨酸的基础培养基上。置空气中于37℃培养。每日检查生长情况，对未生长者需培养5d，方可做出最后判断。 3.5%氯化钠中生长试验：将供试培养物接种于加有NR和3.5%氯化钠的基础培养基上。置空气中于37℃培养。每日检查生长情况，对未生长者需培养5d，方可做出最后判断。 过氧化氢酶试验：滴加3%过氧化氢溶液于显示有细菌生长的试管内，出现气泡者为阳性反应。 氧化酶试验：使用琼脂平板表面经24h微需氧培养生长物，将氧化酶试剂滴于棉拭子上，并用棉拭子去接触表面生长物。在接触点出现深蓝色斑点者为阳性。 硝酸盐还原试验：将供试培养物接种于含1%硝酸钾的基础培养基上。置空气中于37℃培养5d。加入亚硝酸盐检测试剂，出现红色者表明硝酸盐被还原成亚硝酸盐，为阳性反应。 硫化氢产生试验：将肉汤培养物接种于加有0.02%盐酸半胱氨酸的基础培养基上，将一根浸有饱和乙酸铅的滤纸条悬于试管的上部，旋紧试管帽。置空气中于37℃培养。每日检查，观察滤纸条是否变黑，纸条变黑表明有硫化氢产生，为阳性反应。对未出现阳性反应者需培养5d，方可做出最后判断。 马尿酸盐水解试验：用接种环取一满环在琼脂平板上培养过夜的生长物，接种于1%马尿酸钠溶液中，置37℃水浴中放置2h。在每个试管中加入0.5mL茚三酮试剂，将试管于室温下放置2h，出现紫色者为阳性反应。 4.1.3.2抗生素敏感性试验 用灭菌棉拭子将预先准备的布氏肉汤培养物涂布于布氏琼脂平板上。将含头孢噻吩（30μg）和萘啶酸（30g）的圆纸片分别贴于平板表面。置微需氧条件下于37℃培养24h，检查有无抑菌圈。 4.1.3.3 鉴别诊断 根据下表对细菌做出鉴定。 |
