葡萄牙使用非洲猪瘟弱毒疫苗的历史案例分析
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葡萄牙此轮ASF疫情从1960年开始持续发展，1962 年 4 月开始快速蔓延，多地出现持续传播，疫情进一步恶化。因担心疫情失控及对养猪业发达地区产生影响，1962 年 5 月葡萄牙启动 ASF 疫苗田间试验。 2 弱毒疫苗株背景 20 世纪 60 年代葡萄牙使用的疫苗株为细胞传代致弱株。因年代久远，现有资料已无法准确找到该疫苗株详细信息。目前普遍认为，该疫苗株为葡萄牙 1960 年分离的里斯本 60 毒株（Lisbon 60）或1961 年分离的 1455 株（Portuguese isolate 1455）在骨髓细胞连续传代所得。Lisbon60 致弱株接种猪后会使其出现体温反应，但用接种猪抗凝血再次接种试验猪后，被接种猪无体温升高和临床反应，且能在第 71 天时抵御口腔强毒感染。另有试验证实，该致弱株以每头 105TCID50/mL 剂量接种 22头猪后，所有接种猪均健康存活，但在第 117 天攻毒后，大部分猪只（17/18）出现体温反应且 4 头死亡。 1455株在骨髓细胞连续传代后毒力逐渐下降。40 代和 60 代毒可导致接种猪群非特异性运动障碍和典型的 ASF 症状，而 60 代毒引起的临床症状明显减轻，70 代毒已几乎无法引起运动障碍并能抵御强毒株攻击。为找到最佳传代代次，对该致弱株的第 77 代至第 84 代进行了大量评估（最终在第80 代通过评价），试验动物数量超过 400 头，每月至少对 3 头动物进行一次攻毒评价。试验的 10个月内，在 3~12 月龄的动物中均未观察到明显的临床反应，没有死亡发生。疫苗接种后，有研究发现，运动系统中有不良反应的个体仅占很小的比例，主要是短暂的体温升高和轻微的运动障碍，而且更容易在体重较重的动物身上观察到，当然有时也有一些个体表现出非常严重的体温升高。同时，在疫苗接种动物和同群动物中没有看到明显的临床症状，免疫接种动物在免疫后第 14 天便可以检测到抗体产生。 3 疫苗使用经过和后果 20 世纪 60 年代初的实验室研究证明，葡萄牙1455 株的细胞传代致弱株安全可靠，但在临床应用时却没有复制出实验室结果。葡萄牙自 1962年 5 月 18 日开始疫苗田间试验，至 6 月 15 日，共对约 40 000 头动物进行了第一次田间接种试验。 在疫苗接种地区，ASF 疫情先呈现下降趋势但又急剧反弹，这促使葡萄牙进一步扩大试验规模，至7 月份时试验数量达到顶峰。伴随着 ASF 疫情加剧，截止到 1962 年 12 月底，葡萄牙南部地区共有超过55 万头猪接种了弱毒疫苗（表 2）。 表2 1962 年葡萄牙 ASF 疫苗接种情况  疫苗接种后的几个月，葡萄牙感染区域扩大了 3~6 倍，免疫动物死亡率达到 10%~50%，且病症出现时间大幅延后。经初步统计，在 55 万多头接种疫苗的猪群中，有 3.4% 出现了 ASF 发病（包括接种后 3 周内发病的猪），另有 7% 出现了可能与疫苗接种有关的疾病，如仔猪呼吸系统疾病、肌肉骨骼疾病、流产、死产或仔猪早期死亡以及泌乳期的泌乳障碍等。这些发病猪发展到晚期时还会出现并发症，如肺炎、皮肤坏死、关节炎、生殖道炎症或妊娠期疾病、动物生长迟缓、食物加工（消化）指数下降和神经系统疾病等。在这些晚期并发症中，肺部疾病是最严重的，在伊比利亚型幼年病例和某些地区的病例中，还出现较严重的皮肤坏死。所有这些疫苗接种后的并发症在伊比利亚种的猪中出现更为严重和频繁，但在纯种和杂交猪中出现频率较低（杜洛克 - 泽西品种除外，该品种对 ASF 疫苗高度敏感）。 因免疫接种数量众多（55 万多头），难以详细记录接种猪反应，葡萄牙对贝雅（de Beja）地区接种的 1 247 个畜群（共计 128 684 头）进行了较详细记录，总结如下。 3.1 接种后 ASF 发生情况 因疫苗接种时正处于 ASF 流行期，故理论上认为，疫苗接种后 3 周内发病的应属于潜伏期感染猪，不应作为疫苗评价数据（因实验室数据显示疫苗接种不发病）。事实也发现，在 1 247 个接种疫苗的畜群中，共有 55 个畜群出现了 ASF，其中 43个畜群在疫苗接种 21 d 内发病，12 个畜群在疫苗接种 21 d 后发病（8 个畜群来自最近暴发过 ASF的农场，另外 4 个畜群感染原因可能是与受感染猪群同圈饲养，表 3）。由此推断，接种疫苗 21 d 后，ASF 的群体发病率为 0.96%（12/1 247），个体发病率为 1.05%（1 356/128 684）。 |