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动物源性食品中寄生虫的检测——片形吸虫
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急性型：主要是由童虫在腹腔及肝脏移行所产生的症状，如合并有细菌感染可导致严重的后果。此期症状体征并不完全相同，主要有不规则发热（38～40℃）、右下腹痛、食欲缺乏、腹胀、腹泻或便秘。尚可有咳嗽、胸痛、右胸湿性啰音及胸膜摩擦音等。多数有肝肿大，少数伴有脾大及腹水。上述症状可持续4个月左右而消退，并逐渐进入慢性期。 慢性型：当急性症状消退后，可数月或数年无明显不适，某些症状亦可在此期再次出现。如腹痛、腹泻、不规则发热以及反复荨麻疹、黄疸、贫血、低清蛋白血症、高免疫球蛋白血症。后两者是因虫体寄生的胆管上皮损伤、糜烂及成虫食血所致，成虫引起的胆管慢性炎症和增生造成胆管纤维化以致肝硬化，成虫或胆管结石形成亦可使胆管阻塞引起阻塞性黄疸，进而发展为胆汁性肝硬化。 异位损害：又称肝外片形吸虫病。童虫在腹腔中移行穿入或被血流带至肝脏以外的脏器和组织，如腹壁肌肉等引起病变。中东个别地区人群有吃生羊肝的习惯，寄生在羊肝胆管的虫体可侵入人的咽部，引起局部水肿及充血，出现吞咽和呼吸困难，耳聋及窒息等，即咽部肝片形吸虫病。 4 国内外卫生要求 按照国家屠宰检疫和无害化处理的相关规定，经宰后检疫发现寄生虫损害病变轻微时，将损害部分割除，采取无害化处理等销毁措施，其他部分可有条件利用；损害病变严重时，将整个脏器摘除后，化制或销毁。 5 检测方法 可根据流行病学、临床表现、实验室检查和死后剖检等进行综合判定。粪便镜检发现虫卵是确认片形吸虫病的根据。实验室诊断技术如下： 5.1 病原学检查 通过病原学检查，在粪便、十二指肠引流液、腹腔镜活组织检查或组织学检查中发现虫卵是确诊该病的依据。 5.2 免疫学检查 ①抗原皮内变态反应试验，选用高稀释度抗原做皮内试验。通常以成虫盐水冷浸为抗原（稀释度为1∶15000）做皮内试验，与华支睾吸虫病的鉴别率达100%。 ②采用间接红细胞凝集试验（IHAT）、ELISA、间接荧光抗体试验（IFAT）、补体结合试验、对流免疫电泳等方法检测抗体，均有较高的敏感性。 5.3 分子生物学方法 一种快速鉴定肝片形吸虫种类的特异PCR，以肝片形吸虫基因组DNA为模板，以前后盘吸虫、日本分体吸虫等DNA为对照，用肝片形吸虫的特异性引物ITS-1、ITS-2进行PCR扩增，扩增产物经电泳和凝胶成像观察，只有肝片形吸虫样品出现特异性条带，此方法具有较强的特异性。 肝片吸虫ITS-1序列全长为245 pb，ITS-2序列全长为362 pb。肝片吸虫ITS-1的特异性引物：上游引物为5′-CTCATTGAGGTCACAGCAT-3′，下游引物为5′-CAATGGCAAAGAATGGCAAG-3′；肝片形吸虫ITS-2的特异性引物：上游引物为5′-ATATTGCGGCCATGGGTTAG-3′，下游引物为5′-CCAATGACAAAGTGACAGCG-3′。 |