产品监测
动物源性食品中细菌的检测——链球菌
|
1.5.3 γ-链球菌 不产生溶血素，菌落周围无溶血环，也称为丙型或不溶血性链球菌，该菌无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔也引起人或动物感染。 1.6 抵抗力 该菌抵抗力一般不强，60℃经30min即被杀死，对常用消毒剂敏感，在干燥尘埃中可生存数月。乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。βＧ内酰胺类药物是链球菌感染的首选药物。 2 流行病学特征 链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播感染或通过皮肤、黏膜伤口感染，被污染的食品如肉、蛋、乳及其制品也会感染人类。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。 3 危害 链球菌种类多，与人类有密切关系的是猪链球菌。在猪链球菌众多血清型中，2型链球菌是猪的最主要病原，致病性最强。链球菌的致病性与溶菌酶释放蛋白、胞外蛋白因子、溶血素等毒力因子有关。 在我国，2005年四川部分地区发生的2型猪链球菌病暴发流行导致200多人感染、38人死亡。在荷兰，每年屠宰场的工人和养殖场饲养员患猪链球菌脑膜炎的比率大约为3/100000，是不在屠宰场工作的人患猪链球菌脑膜炎的1500倍，屠夫患猪链球菌脑膜炎的比率为1.2/100000。在德国，屠夫、屠宰场工人和肉品加工厂工人是猪链球菌在鼻咽部定居的高危人群。在新西兰，1980年以后的研究显示9%的奶牛场主、10%的肉品检验员及21%的猪场主对猪链球菌2型血清反应为阳性，表明一些人有亚临床感染。 4 检测方法 包括病原的分离鉴定方法及分子生物学方法、免疫学方法ELISA等。 4.1 分离鉴定方法 4.1.1 样品处理 取25g（或25mL）待检样品，加入225mL灭菌生理盐水，制成混悬液。 4.1.2 接种培养 吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉汤中，或直接划线于血平板上（如待检样品污染严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤中），36℃培养24h，接种于血平板上，36℃培养24h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，观察在液体和固体中的培养特征、溶血情况及革兰氏染色、形态，并进行环磷酸腺苷（CAMP）试验、链激酶试验和杆菌肽敏感试验。 4.1.3 CAMP试验 在血琼脂平板上用金黄色葡萄球菌培养物划一条直线，然后将链球菌培养物划一条线，与金黄色葡萄球菌培养物的划线相互垂直，但不要接触，二者相距3～5mm，各链球菌分离菌划线间距10～20mm。置37℃温箱内培养24h后观察结果。在两划线交界处出现箭头样的溶血区为阳性。 4.1.4 链激酶试验 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌18～24h36℃肉浸液肉汤培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，36℃水浴10min，血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。 |