动物源性食品中细菌的检测——霍乱弧菌

  增菌：轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于10mL碱性蛋白胨水中，于（41.5±1）℃培养（18±2）h。

  分离培养：用接种环蘸取增菌液划线接种TCBS琼脂和ChromID Vibrio弧菌显色培养基平板上，于（37±1）℃培养（24±2）h。

  可疑菌落：霍乱弧菌在TCBS上的可疑菌落形态为表面光滑，黄色，直径为2～3mm。霍乱弧菌在ChromldVibrio弧菌显色培养基上的可疑菌落形态为蓝色，蓝绿色到绿色菌落（某些弧菌如创伤弧菌及梅氏弧菌可能会产生与霍乱弧菌相似的蓝色到蓝绿色菌落）。

  细菌纯化：至少应挑取5个可疑菌落传代培养。如果平板上的可疑菌落少于5个，则应该全部挑取传代培养。在氯化钠营养琼脂平板或试管斜面上接种单个可疑菌落传代培养以获得纯培养物。在（37±1）℃培养（24±2）h。

  5.2 鉴定

  5.2.1 显微镜下检验

  （1）革兰氏染色试验 霍乱弧菌为革兰氏染色阴性，无芽孢，弧形或弯曲状。

  （2）动力试验 将可疑菌落接种1管碱性蛋白胨水，在（37±1）℃培养1～6h。滴1滴菌悬液于一干净的载玻片上，盖上盖玻片，在显微镜下检查细菌运动性。霍乱弧菌培养物应为运动性阳性。522氧化酶试验以无菌白色滤纸蘸取营养琼脂表面纯培养物，滴加氧化酶试剂进行氧化酶试验。如果滤纸颜色在10s内变为紫色或者深紫色，则为阳性反应。

  5.2.3 氯化钠三糖铁试验

  接种氯化钠三糖铁斜面，穿刺底层并划线斜面。于（37±1）℃培养箱中培养（24±3）h。

  可疑的霍乱弧菌在氯化钠三糖铁斜面上的反应为底层黄色，斜面黄色，不产生硫化氢，不产气。培养不超过24h（斜面的黄色可能在24h后变为红色）。

  5.2.4 生化试验

  选择革兰氏染色阴性、运动性阳性、氧化酶阳性、氯化钠三糖铁试验符合霍乱弧菌特性的菌落在氯化钠营养琼脂平板或试管斜面上纯化后，进行生化试验或者采用法国生物梅里埃股份有限公司的ID32E鉴定试剂条进行生化鉴定。霍乱弧菌的生化性状见下表。 

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