应对非洲猪瘟，猪场日常管理生物安全细节（三）

4. 粪便

以清洁玻棒或棉棒挑取新鲜粪便少许（约 1g），置于无菌容器内，也可用棉拭子自直肠内直接蘸取或掏取。

5. 脾脏、淋巴结、肝脏、肺脏等实质器官检测 ASFV 时，脾脏为首选器官，其次为淋巴结。肉眼所见有病理变化或没有病理变化的脾脏、淋巴结都应在采集样品范围之内。淋巴结可连同周围脂肪整个采取，其他器官可选病变明显部位与健康部位交界处，以无菌操作剪取直径 1cm 左右的组织样品，加入含 100μg/mL 青霉素和链霉素的 PBS 溶液中，4℃保存运输。或保存于含 50% 甘油的 PBS 溶液中，4℃保存运输。为保持病毒的感染性，样品到达实验室后，立即放入 -80℃低温冰箱内冷冻保存。若条件允许，可另取少许制触片数张，一并送检。

注意事项：在舍外采集死猪脾脏、淋巴结时，必须着一次性防护服、一次性手套，每采集一头死猪的脾脏、淋巴结，更换一次手套、刀片。每头死猪的脾脏、淋巴结，要分开装入自封袋内，确认密封严实后，标注相应信息，放入泡沫箱加冰袋送检。采集死猪样品时，必须在远离猪舍的环保区进行，并且要注意采样时的生物安全，以及采样后的生物安全工作，及时对死猪进行无害化处理，对采样场地进行有效的消毒处置，以确保不污染环境。

6. 水样

可用矿泉水瓶作为水样采样工具。采样点一般为蓄水池、生产区各栋舍出水口、洗车用水等，使用新矿泉水瓶采集采样点水样，每次采样时务必做好生物安全防护和注意生物安全操作，防止将水池内水体进行二次污染和所采集的水样被污染。

7. 环境样品

提前准备纱布 / 棉拭子、采样管、自封袋、生理盐水、一次性手套。纱布裁剪成面积 2cm×5cm 或 10cm 长度的纱布，或者可以直接购买纱布块。

采集方法，第一步戴好手套，用裁剪好的纱布 / 棉拭子，蘸取生理盐水；

第二步擦拭采样点（面积越大越好）；

第三步放入采样管（或样品袋）内，在采样管或样品袋中加入生理盐水，浸没纱布；

第四步做好标记。应用场景，猪舍内外环境样品，如猪舍内（地面、料槽、水槽、刮粪板、墙面、栏杆等），猪舍外（储粪池、水、地面、道路等），生活区和办公区（地面、桌面、电脑等）。车辆样品，采样部位包括车头、驾驶室、车轮（前）、车轮（后）、车体外表面（左）、车体外表面（右）、车顶、底盘、车厢内表面、车厢外表面、车厢内部升降（第一、二、三层等）。

注意事项：采样前，务必保证采样管、纱布、自封袋等物品处于干净清洁、未被污染的状态。一个采样点换一个手套。每个采样点或或者一个单元的样品要单独放于一个自封袋内，标记好采样地点。附上送检单，冷藏保存或运输。

8. 人员样品

可用蘸取生理盐水的棉拭子，擦拭相关人员的头发、鼻腔、口腔、耳朵、脸部、手及指甲缝、衣服、鞋底、手机等部位或物品，拿出棉拭子放到加有 2~3mL 生理盐水的离心管中，挤压几次，并折断木棒，盖上离心管管盖。

9. 软蜱

在非洲和欧洲的很多国家，软蜱可以通过叮咬猪或野猪传播 ASFV，成为非洲猪瘟非常重要的生物虫媒，并可以作为ASFV 的自然宿主。一般来说，可以采用手工方式捉软蜱。通过手工移除裂缝和猪舍墙壁孔洞中的尘土，清理木质或瓦屋的屋顶缝隙，从猪舍道路上或路边挖掘均可进行软蜱的收集。也可以在野猪出没的地方查找软蜱的存在。但这种方法费时、费力，由于软蜱的寄居环境潮湿，黑暗，发现难度大，且难以找到更小的幼虫阶段的虫体。因此，手工方法不适合进行大规模软蜱的采集。

在非洲、欧洲的一些国家，二氧化碳诱捕法、真空抽吸法广泛应用于田间软蜱样品的采集。

10. 病理组织学检测样品

若需采集病料进行病理组织学检测，应选取剖检有典型病变的部位，连同邻近的健康组织一并采取。如果某种组织器官具有不同病变时应各采一块，将标本切成 1~2cm3 大小，用清水冲去血污，立即浸入固定液中。

常用的固定液为 10% 福尔马林，固定液的用量应为标本体积的 10 倍以上。脑、脊髓组织最好用 10% 中性福尔马林溶液（即在 10% 福尔马林溶液中加 5%~10% 碳酸镁）固定。初次固定时，应于 24h 后更换新鲜溶液一次。一头病死猪的标本可装在一个瓶内，如同时采集几头病猪的标本，可分别用纱布包好，每包附一纸片，纸片上用记号笔标明病猪的号码。

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