一例种鸭沙门氏菌和大肠杆菌混感的诊治（图）

图3  肝脏肿大

  1.3 样品采集与处理

  采集病死雏鸭的病变肝脏、脑组织，孵化器中的死胚和饮水进行细菌分离。取病死鸭的肝脏、脾脏、脑组织按体积1:4加入无菌生理盐水研磨，加入终浓度1000U双抗，4℃作用2h，冻融3次，8000rpm/min离心10min取上清-20℃保存备用。另外采集种鸭、雏鸭血液分离血清，4℃保存备用。

  1.4 细菌分离培养

  取病变肝脏、脾脏无菌条件下用接种环挑取组织涂5%血清LB平板；鸭脑无菌剥离头盖骨，挑取脑中组织涂于5%血清LB平板；死亡胚胎外表用75%酒精消毒，无菌取卵黄液，接种于5%血清LB平板，37℃培养过夜，取200μL水样涂5%血清LB平板，分离的细菌进行镜检及PCR检测。

  1.5 血清学检测

  将采集分离的种鸭、雏鸭血清样本利用平板凝集试验检测沙门氏菌抗体。

  1.6 PCR检测

  1.6.1 病料检测

  取处理匀浆液200μL，按Simply P病毒DNA/RNA共提取试剂盒操作说明提取核酸，用实验室设计合成的检测引物分别检测鸭肝炎病毒、鸭黄病毒、鸭呼肠孤病毒、腺病毒、鸭圆环病毒、鸭瘟病毒。

  1.6.2 细菌检测

  利用PCR方法对分离的细菌进行沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌检测。

      1.7药敏试验

      取细菌分离培养的单菌落，以生理盐水稀释后涂布于5%血清LB平板上，选取克林霉素、林可霉素、丁胺卡那、恩诺沙星、氟苯尼考、头孢噻肟、头孢曲松、红霉素药敏片贴于平板上，37℃培养过夜，用游标卡尺量取抑菌圈直径。

      2 结果与分析

      2.1 细菌分离及血清学检测结果

      从肝脏、脑、死胚卵黄中均分离出细菌，见图4。

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