兽药制剂中非法添加25种化合物检查方法

1、 适用范围

1.1 本方法适用于黄芪多糖注射液、维生素C可溶性粉、硫酸卡那霉素注射液中非法添加磺胺脒、磺胺、磺胺二甲异嘧啶钠、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、甲氧苄啶、磺胺吡啶、马波沙星、磺胺甲基嘧啶、氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯达嗪钠、沙拉沙星、磺胺多辛、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺苯甲酰、磺胺氯吡嗪钠、磺胺地索辛、磺胺喹噁啉或磺胺苯吡唑的检查。

1.2 用于其他兽药制剂中非法添加磺胺脒、磺胺、磺胺二甲异嘧啶钠、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、甲氧苄啶、磺胺吡啶、马波沙星、磺胺甲基嘧啶、氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯达嗪钠、沙拉沙星、磺胺多辛、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺苯甲酰、磺胺氯吡嗪钠、磺胺地索辛、磺胺喹噁啉、磺胺苯吡唑等检查时，需进行空白试验和检测限测定。

2、检查方法

照高效液相色谱法（附录0512）测定。

2.1 色谱条件与系统适用性试验

采用超高效液相色谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Agilent EclipsePlusC18 RRHD2.1mm×150mm，1.8µm，或其他等效的色谱柱）；以0.1%甲酸溶液（三乙胺调节pH值至3.40）为流动相A，以乙腈为流动相B，流速为每分钟0.2ml，柱温25℃，按下表进行线性梯度洗脱；二极管阵列检测器检测，采集波长范围为200nm~400nm，分辨率为1.2nm，记录280nm波长处的色谱图。

梯度洗脱方法

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	91	9
7	86	14
20	84.5	15.5
25	80	20
30	76	24
37	70	30
39	50	50
39.5	91	9
42	91	9

取马波沙星、磺胺甲基嘧啶、磺胺喹噁啉和磺胺苯吡唑对照品适量，加60%乙腈溶液，制成每1ml中各含4μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。取0.5µl注入超高效液相色谱仪，记录色谱图和光谱图。马波沙星与磺胺甲基嘧啶色谱峰、磺胺喹噁啉与磺胺苯吡唑色谱峰的分离度均应不小于1.0。

2.2 测定法

取黄芪多糖注射液1.0ml、硫酸卡那霉素注射液1.0ml或取维生素C可溶性粉1.0g，置50ml量瓶中，加60%乙腈溶液约40ml，超声5分钟，放冷，加60%乙腈溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取磺胺脒、磺胺、磺胺二甲异嘧啶钠、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、甲氧苄啶、磺胺吡啶、马波沙星、磺胺甲基嘧啶、氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯达嗪钠、沙拉沙星、磺胺多辛、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺苯甲酰、磺胺氯吡嗪钠、磺胺地索辛、磺胺喹噁啉或磺胺苯吡唑对照品适量，加60%乙腈溶液，制成每1ml中含4μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 取供试品和对照品溶液各0.5µl，分别注入超高效液相色谱仪，同时记录色谱图和光谱图。通过与相应对照品溶液色谱图保留时间和光谱图比对，确定供试品中是否含有磺胺脒、磺胺、磺胺二甲异嘧啶钠、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、甲氧苄啶、磺胺吡啶、马波沙星、磺胺甲基嘧啶、氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯达嗪钠、沙拉沙星、磺胺多辛、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺苯甲酰、磺胺氯吡嗪钠、磺胺地索辛、磺胺喹噁啉或磺胺苯吡唑。

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