马属牲畜病

非洲马瘟防控知识问答

日期：06-01 作者：佚名- 小 + 大

63. OIE 推荐的临床病例的确认方法是什么？

OIE 推荐的临床病例确诊方法是实时荧光 RT-PCR 和病毒分离。非洲马瘟可直接用 BHK-21、MS、VERO 等哺乳动物细胞系进行分离，亦可用库蠓、蚊子等昆虫细胞系进行分离。实时荧光 RT-PCR 具有高度敏感性，可应用于感染动物血液及其他组织中非洲马瘟病毒核酸的快速鉴定。

64. 非洲马瘟病毒的血清分型用什么方法？

到目前为止，病毒中和试验一直用于非洲马瘟病毒的血清分型，该方法可利用型特异性抗血清鉴别非洲马瘟分离株。该技术至少需 5 天才可获得结果。常规 RT-PCR 和实时 RT-PCR方法可对组织和血液样品中的非洲马瘟病毒进行快速分型。但由于非洲马瘟病毒基因组会发生变异，尤其是在靶基因VP2 编码区，因此，病毒中和试验试验仍是非洲马瘟分离株血清分型的金标准。

65. 开展非洲马瘟监测可选用什么检测方法？

基于 VP7 抗原的间接 ELISA 和竞争 ELISA 可用于检测非洲马瘟病毒群特异性抗体，特别适用于大规模样品筛查，这两种方法已获得欧盟认可（2002 年）。免疫印迹试验也可用于检测非洲马瘟病毒抗体，适用于小量样品检测。已有商品化竞争 ELISA 试剂盒。

66. 如何采集马匹血样？

1.保定好马匹，使其头部稍前伸并稍偏向对侧。

2.对颈静脉局部进行剪毛、消毒。

3.看清颈静脉后，采血者用左手拇指（或食指与中指）在采血部位稍下方（近心端）压迫静脉血管，使之充盈、怒张。

4.右手持采血针头，沿颈静脉沟与皮肤呈 45º角，迅速刺入皮肤及血管内，如见回血，即证明已刺入；使针头后端靠近皮肤，以减小其间的角度，近似平行地将针头再伸入血管内 1～2 厘米。

5.放开压迫脉管的左手，收集血液。采完后，以干棉球压迫局部并拔出针头，再以 5％碘酊进行局部消毒。

67. 怎样制备血清样品？

将采血管在室温下倾斜放置 2～4 小时（防止暴晒），待血液凝固后 37℃温箱内放置 1 小时或 4℃冰箱内过夜，待大部分血清析出后经 1500～2000 g 离心 5 分钟，分离血清。

68. 如何采集用于病原检测的样品？

发热动物取抗凝血，死亡动物取 2 克左右脾、肺或淋巴结， 4℃保存或放入 50％甘油-磷酸盐缓冲液中，在 4℃条件下运送和保存。