1.2.6 细菌16S鉴定可疑菌落纯化培养3代后,挑取单菌于BHI增菌培养,提取菌液DNA模板,参考细菌16SrDNA通用引物(27F:AGAGTTTGATCCTGGCTCAG:14928:CGGTTACCTTGTTACGACTTC)扩增片段,比对确定可疑菌种属。PCR常规体系反应程序:预变性940CSm;变性94°C 30 s,退火54°C 30 s,延伸72°C 1.5 min, 35个循环;延伸72°C 10 min。扩增产物于1%琼脂糖凝胶在20XTAE电泳液中电泳30 min, EB浸泡15 min,在凝胶成像系统中记录结果。将清晰明亮条带对应的PCR产物,送鼎国生物工程技术服务有限公司测序,所得序列在BLAST上进行同源性比对。 1.2.7 生化试验纯培养可疑菌落,挑取同一平皿单菌于细菌微量生化鉴定管中37°C培养12--36 h,按说明书判读,将结果与第8版《伯杰细菌鉴定手册》比对。 2 结果 2. 1临诊症状 发病驴多消瘦,体温升高40--43°C,呼吸急促或困难,多为腹式呼吸,精神沉郁,食欲不振,渴欲增加;随着病情发展,病驴陆续出现死亡,个别病驴鼻孔流出灰黄色分泌物(图1),大部分驴被毛杂乱无光泽、消瘦(图2)。
图1 发病驴鼻孔分泌灰黄色分泌物 图2 病死驴消瘦、被毛杂乱 2. 2病理剖检 消化系统:小肠肠管显著充血、出血;肠系膜出血,血管扩张、充血;结肠管腔显著扩张,肠壁紧张性增强,部分肠段淤血,肠道浆膜破裂,内容物溢出;脾脏淤血、肿胀,表面有广泛性灰白色粟粒大、结节状增生(图3); 呼吸系统:支气管茹膜充血,肺脏体积增大,表面颜色变浅,有肋骨压痕,出血、充血扩张,肺脏切面流出大量如酱油样暗黑色液体(图4)。
图3 病变脾脏 图4 病变肺脏 |
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