摘要:2018年5月中旬,新疆和田地区某驴养殖场刚引进的8 000余头肉驴陆续出现一种急性、高热性群发疾病,平均日死亡数高达20余头。发病驴临诊表现为体温升高(40--43°C)、心跳加快、腹式呼吸、食欲废绝以及分泌灰黄色浓稠鼻液等。剖检病死驴可见,肝脏肿大、淤血,肺脏充血、出血,气管内聚集大量暗红色液体,脾脏暗黑且极度肿大,有些死驴有胃破裂现象,腹腔内充满胃内容物,其他脏器未见明显病理变化。无菌采集驴心血、肺脏、肝脏、脾脏和肾脏样本,进行细菌分离鉴定和药敏试验,通过触片镜检、分离培养、16S鉴定、生化试验等,鉴定分离菌为马链球菌马亚种。药敏试验显示,该分离菌株对ß-内酞胺类药物敏感,对氨基糖普类药物和四环素类药物敏感性低。根据药敏试验结果迅速选择合适药物进行治疗,驴群病情很快得到控制。结合临床症状、剖检病理变化、实验里诊断、干预治疗等,最终确诊该驴场发生的疫病是由马链球菌马亚种引起的驴腺疫。 马腺疫(equine strangles)俗称喷喉,中兽医称槽结、喉骨胀,是由C群链球菌中的马链球马亚种(Streptococcus equi subsp)引起的一种马属动物急性热性、高度接触性传染病,所有马属动物对其都易感,但马最易感,骡和驴次之,尤以1-2岁马多发。Jorda-nus Ruffus 1251年报道了马链球菌引起的马疾病,通常称为腺疫(C strangles)。2017年前,腺疫是包括美国在内许多国家最常报道的马属动物疫病。在我国,马腺疫一年四季均会发生,呈散发性或地方性流行。新疆是全国养马数量最多的地区,有些地区的马腺疫发病率高达80%--90%。王彩蝶等报道,新疆昭苏县、特克斯县、富蕴县、吉木乃县的马养殖区均有不同程度的马腺疫链球菌感染。但马链球菌导致驴发病的报道较少。本次疫情发生在新疆和田地区一驴养殖场。2018年该场陆续从山东省、河南省引进关中驴和德种驴2种肉用驴(平均体质量200-350 kg),3月份引进公驴700头,至6月该养殖场饲养规模已达8000头,5月中旬暴发疫病后,日死亡数量达20余头,5月底病死驴已有500余头,病因不详,为此进行了实验室诊断。 1 材料与方法 1. 1材料 1.1.1 病料无菌收集病死驴肺脏、肝脏、脾脏、肾脏和心血样本。 1.1.2 材料及试剂材料:洁净的剪刀、镊子、托盘、酒精灯、无菌试管、接种环、载玻片、培养皿等。主要试剂:革兰氏染色液、脑心浸出液肉汤 (Brain Heart Infusion Broth BHI)、Mueller-Hinton琼脂(MH ) , LB固体培养基,购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司;2XTaq PCR GreenMix, ddH20, 16SrDNA通用引物等,购自天根生化科技(北京)有限公司;细菌微量生化鉴定管、法国科玛嘉尿路菌群显色培养基,购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司;5%绵羊血平板,自制。主要仪器:自动高压灭菌器(HVE-50)、离心机(Eppendorf AG 22331 Hamburg)、空气浴振荡培养箱(ST-F 160AC、SW-CJ-2F双人双面垂直洁净工作台,为上海博讯实业有限公司医疗设备厂产品;TProfes-sional PCR仪,为Biometra公司产品;凝胶成像系统,为UniversalHoodll Bio-Rad公司产品。 1.2 方法 1.2.1 临诊诊断观察发病驴体温、心跳、呼吸、可视茹膜、营养状况等,结合问诊进行初步诊断。 1.2.2 剖检诊断剖检病死驴,观察并记录脏器的结构、大小、颜色,检查有无出血等病理变化。 1.2.3 样本触片镜检用镊子夹取样品内部中心处组织,擦拭在载玻片上,按革兰氏染色液使用方法进行染色,用油镜观察。 1.2.4 药敏试验本次药敏试验选择10类共计30种药敏片。蘸取适量菌液,用涂布棒均匀涂布于MH培养基后,贴上药敏片。1个培养皿贴4-5片药敏片为宜,放置好后37°C恒温培养8--12 h,测量抑菌圈大小。 1.2.5 细菌分离纯化在超净台内,用接种环蘸取菌液,以“Z”字形状接种于5%绵羊鲜血平板、法国科玛嘉尿路菌群显色培养基,37 °C恒温培养12--24 h,选取优势可疑菌进行纯化培养并革兰氏染色、镜检。 |
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