《禽白血病净化技术规范》团体标准

C. 3. 2. 5结果判定

C. 3. 2. 5. 1试验结果同时符合下列条件，方为有效:

①阳性对照平均值一阴性对照平均值>0. 20;

②阴性对照平均值<0. 2;

C. 3. 2. 5. 2计算公式:

S/P=(样品平均值一阴性对照平均值)/(阳性对照平均值一阴性对照平均值)

C. 3. 2. 5. 3按以下方法判定结果:

阳性:S/P值>0. 2，即禽白血病p27抗体阳性。

阴性:S/P值<0. 2，即禽白血病p27抗体阴性。

附录D

(资料性附录)

弱毒活疫苗中禽白血病病毒污染检测操作程序

D. 1细胞培养检查法

D.1. 1细胞培养检查法操作方法

按照《中国兽药典》规定对疫苗中禽白血病病毒污染主要采用细胞培养检查法进行检测，即将疫苗样品接种鸡胚成纤维细胞(CEF)盲传三代，取三个代次的细胞培养物反复冻融3次，5 000g离心3分钟，测定细胞培养上清中禽白血病病毒p27抗原，用以确定所检测疫苗中是否存在禽白血病病毒污染。鉴于鸡马立克氏病毒活疫苗、鸡新城疫病毒活疫苗、鸡痘病毒活疫苗、鸡传染性法氏囊病毒活疫苗等接种CEF后均可造成细胞病变(CPE)，导致禽白血病病毒在细胞上复制受到干扰，为此对不同的疫苗需要进行一定的预处理。

D.1. 2不同样品的处理与接种

D.1.2.1样品的处理

D.1.2.1.1含鸡新城疫病毒(低毒力弱毒株)的制品通常按照如下程序进行:取0.8mL(含200羽份)疫苗，加入等体积的鸡新城疫病毒特异性抗血清置37℃左右中和60分钟，全部接种到CEF单层。

D.1.2.1.2含鸡马立克氏病细胞结毒的制品通常按照如下程序进行:取1000(或以上)羽份制品，加无菌注射用水，使每4. 0 mL溶液中含500羽份制品;置2--8 °C 1小时，冻融3次;按10%体积加10倍浓度的M-199浓缩培养液，2--8°C,  5 000 g离心15分钟，取上清液经0. 22 um滤器过滤1次，取滤液4. 0 mL接种CEF单层。如果含有鸡马立克氏病火鸡疤疹病毒时，取滤液与等体积的鸡马立克氏病火鸡疤疹病毒特异性抗血清混匀，置37℃作用60分钟，全部接种于CEF单层。

D.1.2.1.3含鸡马立克氏病火鸡疤疹病毒的制品通常按照如下程序进行:取1 000(或以上)羽份制品，用4. 0 mL(或适量)不含血清的M-199培养液溶解，使最终为500羽份/2. 0 mL;  2--8°C,  10 000 g离心15分钟;上清液经0. 45 um滤器过滤1次，0. 22um滤器过滤2次，取滤液2.OmL上清与等体积的鸡马立克氏病火鸡疤疹病毒特异性抗血清混匀，置37℃作用60分钟，全部接种于CEF单层。

D.1.2.1.4含鸡痘病毒的制品通常按照如下程序进行检测:取1 000(或以上)羽份制品，用4. 0 mL(或适量)不含血清的M-199培养液溶解，使最终为500羽份//2. 0 mL;  2--8°C,  12 000 g离心15分钟;上清液经0. 8 um, 0. 45um, 0. 22 um和0. 1um滤器各过滤1次，取滤液2.0mL接种于CEF单层。

D.1.2.1.5含鸡传染性法氏囊病病毒的制品通常按照如下程序进行:取1 000(或以上)羽份制品，用4. 0 mL(或适量)不含血清的M-199培养液溶解，使最终为500羽份//2. 0 mL;  2--8°C,  10 000 g离心10分钟;取滤液2.0mL上清与等体积的鸡传染性法氏囊病病毒特异性抗血清混匀，置37℃作用60分钟，全部接种于CEF单层。

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