《禽白血病净化技术规范》团体标准

6 已净化鸡群的净化状态维持措施

6. 1种源的选择

对饲养进口祖代及其以下代次的鸡场，应从无外源性禽白血病病毒感染的育种公司购入苗鸡。应要求供应商提供初产种蛋(100--200枚)，检测蛋清中p27抗原为阴性。同时，可要求供应商提供相关种鸡群在相应年龄(23周龄后)的禽白血病病毒血清抗体检测报告和留种孵化前所产种蛋的蛋清p27抗原检测报告。禽白血病病毒血清抗体检测，可采用针对禽白血病病毒p27蛋白抗体的ELISA检测方法，同时也可采用针对禽白血病A/B亚群和J亚群抗体的商品化ELISA试剂盒检测。禽白血病病毒p27蛋白抗体的ELISA检测操作程序见附录C

6. 2鸡群禽白血病病毒感染状态监测

种鸡群在饲养过程中应进行禽白血病定期监测，以了解鸡群禽白血病病毒的感染状态。可在种鸡群开产后、留种蛋前，采集500份左右血清样品，用ELISA方法检测禽白血病病毒A/B亚群及J亚群抗体或p27蛋白抗体。同时，采集种蛋用ELISA方法检测蛋清中的禽白血病p27抗原。如果血清抗体阳性率或蛋清p27抗原阳性率超过1%时，应对鸡群采集抗凝血接种DF-1细胞进行病毒分离鉴定。

6. 3鸡群之间水平传播的预防

种鸡场应执行全进全出制度。饲养已经净化的品系时，应避免不同来源的种鸡在同一鸡场饲养而发生交叉感染。一个鸡场在同一时期只能饲养同一批来源的种鸡。不同来源的种蛋在孵化和出雏之时应分开，避免与其他鸡群(特别是非净化鸡群)同时孵化和出壳，以减少禽白血病水平传播风险。

6. 4生物安全措施的建立

种鸡场地理位置应相对隔离，远离其他鸡场。运送物品车辆以及人员出入，均应执行消毒制度，同时应尽可能降低种鸡场所需物品与外界的交流。接触核心群的工作人员应固定化，避免其他鸡群的饲养员进入实施净化的鸡群中工作。种鸡场应在鸡舍安装防鸟网或其他防鸟设施，并定期检查维护。

6. 5疫苗的管理和使用

净化鸡群使用的针对各种鸡病的弱毒疫苗，应是经过《中国兽药典》规定程序检测合格的疫苗，确保无外源性禽白血病毒污染。用鸡胚或鸡胚来源的细胞作为原材料生产的疫苗，以及对1日龄雏鸡通过注射法(包括皮肤刺种)使用的疫苗，使用前应进行检测。鸡用弱毒活疫苗中禽白血病病毒污染检测操作程序可参考附录D。

附录A

(规范性附录)

公鸡精液中病毒分离鉴定操作程序

A. 1使用75%乙醇将泄殖腔周围擦拭干净，将公鸡精液采集到1. 5 mL已灭菌的离心管中，一只公鸡的精液对应一个离心管，编号后放入冰盒中暂存。采集的精液，用含有青链霉素(青霉素100 U/mL,链霉素0. 1 mg/mL)的细胞维持液，按照最终稀释度为1:28 --1:56充分混匀后接种DF-1细胞，在37℃，5%COz条件下培养2小时后换为正常细胞维持液。

A. 2上述细胞在37℃，5 % COz条件下培养7 d--9 d，取出冻融一次，然后分别取0. 1 mL细胞培养上清按照NY/T 680或等效商品化试剂检测禽白血病病毒p27抗原，如检测结果阳性，则判定所检测公鸡精液中存在外源性禽白血病病毒。

附录B

(资料性附录)

《动物疫病净化示范场评估标准(试行)》(2017版)中有关禽白血病净化评估标准

B. 1净化评估标准

同时满足以下要求，视为达到净化标准:

——种鸡群抽检，禽白血病病原学检测均为阴性;

——连续两年以上无临床病例;

——现场综合审查通过。

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