非洲猪瘟——我国养猪业的重大威胁

2.2 传播方式

ASF 的宿主和传播媒介涉及家猪、各种野猪和部分软蜱，在其间保持着复杂的循环。在非洲，软蜱感染ASFV 后通过叮咬传染给野猪，未感染 ASFV 的软蜱通过叮咬感染的野猪获得病毒，通过叮咬再感染其他野猪，形成“野猪-软蜱-野猪”循环(森林循环)，另外还存在家猪-家猪和野猪-野猪循环。从野生宿主到家猪的传播机制还不完全清楚[19]。南非野猪和家猪之间杂交、家猪误食带毒的野猪肉、家猪与野猪共存区域通过蜱传播给家猪都可能为ASFV 的传播提供机会。ASFV 一旦传入家猪，感染猪的排泄物、分泌物、血液、组织等均含有病毒，成为危险的传染源。ASFV 可通过直接接触感染猪尸体、污染物、肉制品在地区甚至国际范围内传播[20-21]。

2.3 分子流行病学

分子流行病学研究对调查 ASF 的流行病学模式以及病源的追溯具有重要作用。最初通过 ASFV 基因组限制性酶切图谱分析及测序技术，根据基因组长度的差异来分析病毒流行情况。目前主要先基于p72(B646L)基因分型，再根B602L、E183L 或CP204L 基因进一步区分亚型[22]。基于 B646L 基因已鉴定出 24 个基因型[8-9]，其中 20 个基因型仅存在于东非和南非[23]。基因 I 型或称 ESAC-WA 基因型， 由欧洲、南美洲、加勒比海和西非等地区的分离株组成[24]。最近流行于高加索和俄罗斯的 ASFV 为基因 II 型[2]。基因 II 型 ASFV 最初很可能是从莫桑比克传入马达加斯加。在非洲东部和南部，一些基因型(如 VIII 和 XIX)高度同源，这些毒株可能仅限于猪之间传播，或在猪与寄生于家猪的蜱间传播。另外一些基因型(如 V、X、XI、XII、XIII 和 XIV) 毒株同时存在于猪-蜱循环和猪-猪循环[25-26]。遗传多样性也可能受到不同分离株协同感染、重排和病毒进化的影响[27]。我国爆发的 ASF 疫情是由 ASFV 基因 II 型毒株引起[6]。不同 ASFV 基因型地理分布不同，这说明了 ASF 流行病学的复杂性。

3. 非洲猪瘟的诊断及疫苗研究

3.1 诊断

3.1.1病原学检测方法 ASFV 结构复杂，在感染细胞内可检测到 100 多种病毒蛋白，其中具有免疫原性和诊断意义的主要有 p72、p54、p32 等蛋白。PCR 方法因其具有很高的灵敏度和特异性，是国际贸易中OIE 指定的 ASFV 检测方法。PCR 技术同时适用于检测不适合进行病毒分离的腐败组织或血液样品。

(1)普通 PCR 普通 PCR 主要为基于相对保守的 ASFV p72 基因设计引物建立的诊断方法[28-29]，可用于ASF 的监测和诊断。最近的一份研究报告显示，OIE 推荐的 PCR 方法敏感性和特异性降低，推测可能是由于引物和病毒靶基因的核苷酸不匹配所致[30]。因此，本团队建立了改进的 PCR 方法，可以检测目前流行的ASFV 毒株 [28]。

(2)荧光定量 PCR(quantitative Real-time PCR， qPCR) qPCR 利用特异性寡核苷酸探针的荧光信号检测目标序列的扩增，具有快速、灵敏、交叉污染低、并可对结果定量等优点。2003 年，KING 等建立了针对 ASFV p72 基因的 qPCR，其引物和探针获得 OIE 认证[31]。2007 年，MCKLLEN 等建立了分子信号实时PCR，该方法灵敏度较高，可与 ASFV 症状相似的猪瘟进行鉴别诊断[32]。

(3)多重 PCR(multiplex PCR) 随着集约化养猪业的发展，混合感染比较普遍[33]。此外现地存在与ASF 临床症状非常相似的疾病，如猪瘟，仅根据临床症状和病理变化，难以鉴别[34]。多重 PCR 方法可有效鉴别诊断的同时，兼具普通 PCR 快速、灵敏的特点。HU 等建立的多重 PCR 检测可以同时检测并鉴别ASFV、猪瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus， HP-PRRSV)和伪狂犬病病毒(pseudorabies virus，PRV)，并可用于这些疫病的流行病学监测[35]。

(4)等温扩增技术 Invader 分析是美国三波技术公司开发的一种等温非“PCR”的 DNA 和 RNA 定性和定量检测方法[36]。基于 Invader 技术设计的ASFV特异性信号探针和 Invader 寡核苷酸可特异地检测ASFV，并且与 CSFV 没有交叉反应。JAMES 等利用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification， LAMP) 技术靶向特异性拓扑异构酶 II 基因检测ASFV，而与 CSFV 无交叉反应[37]。GAO 等建立了检测ASFV 的交叉引物扩增(cross-priming amplification，CPA)方法，并与试纸条联用，达到快速诊断 ASF 的目的[38]。同时该方法不需要昂贵的热循环仪器，在廉价的水浴设备中即可完成，适合现地快速检测。

(5)红细胞吸附试验(hemadsorption test，HAD)HAD 试验是利用猪红细胞能够吸附在感染 ASFV 的猪单核细胞或巨噬细胞表面，形成特征性花环的特性， 并且大多数 ASFV 毒株均可以产生这种吸附现象。由于该方法耗时长、操作繁琐，不能用于非血细胞吸附毒株的诊断，只能作为 ELISA、PCR 等阳性结果确认的一个参考试验。

(6)荧光抗体试验(the fluorescent antibody test， FAT) FAT 通过使用异硫氰酸荧光素结合的特异性抗体检测细胞内抗原。该方法可以用来检测疑似猪组织中的 ASFV 抗原。FAT 可用于检测无 HAD 现象的ASFV 毒株，从而识别非血细胞吸附病毒株。另外， 该方法还可根据荧光强弱来估测抗原含量，初步进行病毒定量。BOTIJAL 等通过FAT 快捷地检测出ASFV， 并且该方法具有很高的敏感性，但是荧光素的非特异性反应会造成假阳性结果[39]。尽管 FAT 是急性 ASF 的一种高度敏感的检测方法，但是对亚急性和慢性ASF 的检测灵敏度较低。

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