副猪嗜血杆菌与猪链球菌混合感染案例分析（图）

图4 猪链球菌PCR鉴定结果。M：DNA分子Marker；“+”表示阳性对照，“－”表示阴性对照；

3.2 细菌的分离培养

将检测到含有副猪和链球菌病料深层组织接种在TSA培养基（5%胎牛血清+1%NAD）上分区划线培养24 ~ 48 h，在涂有发病仔猪的关节液和关节脓性渗出物的TSA平板上均长出了针尖大小、无色透明、边缘光滑整齐、湿润的菌落。同时涂有关节脓性渗出物的血平板上出现了明显的 β 溶血环，为 β 溶血（图5）。挑单菌落进行涂片及革兰氏染色镜检，发现关节脓性渗出物中的细菌镜下呈紫色，为革兰氏阳性菌；关节液中的细菌镜检呈红色，为革兰氏阴性菌（表3）。

图5 关节脓性渗出物在血平板上的菌落形态

3.3 细菌PCR鉴定
      将TSA平板及血平板上的菌落纯化培养后进行细菌的PCR鉴定，挑出纯化的关节脓性渗出物的菌落用猪链球菌特异性引物均扩增出了207 bp大小的条带，大小与目的片段一致，结合菌落出现 β 溶血及革兰氏阳性菌，可判定为溶血性链球菌。挑出的纯化后关节液形成的菌落用副猪特异性引物均扩增出197 bp大小的条带，结合TSA上的菌落形态及革兰氏阴性菌，可判定为副猪嗜血杆菌（表3）。

表3 细菌分离培养后对菌落进行鉴定

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