兽医图谱

副猪嗜血杆菌与猪链球菌混合感染案例分析(图)

日期:08-06 作者:郭春和、朱振邦等- 小 + 大

2.2.2 细菌分离培养

首先配制TSA平板(加有5%胎牛血清和1% NAD),将剪取的病变组织涂抹于TSA平板和血平板上,用接种环划线后置于37 ℃培养箱培养24 ~ 48 h,观察菌落形态,并挑取单菌落进行纯化培养。

2.2.3 革兰氏染色镜检

挑取纯化培养后的单菌落涂片,将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1 min,水洗;滴加革兰氏碘液,1 min,水洗;滴加脱色酒精,约30 s;水洗后滴加沙黄复染液,复染1 min,水洗,待干,显微镜下观察细菌的形态特点。

2.2.4 药敏试验

挑取纯化培养的单个菌落加入500 μL的无菌培养基中37 ℃摇至培养基浑浊,离心后吸去部分上层液,取200 μL菌液至TSA平板中,用玻璃棒涂抹均匀,随后贴上各种药敏纸片,37 ℃培养24 ~ 48h,用直尺测量抑菌圈的直径,依据药品说明书判定结果(表2)。

表2 药敏实验判定标准

3、结果

3.1 病料的PCR鉴定

由PCR电泳图可知,用猪繁殖与呼吸综合征病毒套式PCR引物在发病仔猪解剖后的淋巴结、肺均未扩增出914 bp阳性条带,提示未检测到蓝耳抗原(图2);用副猪嗜血杆菌PCR套式引物在发病仔猪解剖后的肺、心包液、腹股沟淋巴结及肿胀关节液等样品中扩增出197 bp阳性条带,提示检测到副猪嗜血杆菌抗原(图3);用猪链球菌PCR引物在发病仔猪解剖后关节脓性渗出物、腹股沟淋巴结及肿胀关节液扩增出207 bp阳性条带,提示检测到链球菌抗原(图4)。

图2 猪繁殖与呼吸综合征病毒PCR鉴定结果。M:DNA分子Marker;“+”表示阳性对照,“-”表示阴性对照;

编号前面3和5为发病仔猪耳号第一位数字;阳性条带为914 bp。

图3 副猪嗜血杆菌PCR鉴定结果。M:DNA分子Marker;“-”表示阴性对照;

编号前面3和5为发病仔猪耳号第一位数字;阳性条带为197 bp。

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