副猪嗜血杆菌与猪链球菌混合感染案例分析（图）

1、发病情况及临床症状

江西某猪场仔猪陆续出现行动困难、跛行、蹄不着地等症状，仔猪四肢关节出现不同程度的肿大，触诊有波动感，有的猪的关节按压时有摩擦感，用力按压猪有疼痛感。剖检发现心包有积液，肺脏有部分淤血。划开后肢关节有大量的黄色脓性渗出物，关节腔内有黄色积液，关节囊、滑膜严重增生，关节腔内出血充血严重，且有炎性增生（图1）。

2、实验室诊断

2.1 材料

2.1.1 血样采集

对2头发病仔猪进行前腔静脉采血5 mL，析出血清，用于血清学诊断

2.1.2 仔猪剖检

对2头发病仔猪进行病理剖检，分别剪取出肺脏、腹股沟淋巴结、脾脏等病变组织并收集心包液、关节液及关节脓性渗出物，用于细菌的分离培养和PCR鉴定

2.1.3 培养基及试剂

大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA，广东环凯微生物科技有限公司）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）、胎牛血清、血平板、革兰氏染色液、2×Taq PCR StarMix with Loading Dye（GenStar）、病毒DNA/RNA提取试剂盒（Magen）、RT-PCR试剂（Takara）

2.1.4 药敏试验材料

环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、卡那霉素、替米考星、磺胺甲恶唑、大观霉素、氨苄西林链霉素、新霉素、庆大霉素、阿莫西林、氟苯尼考、头孢曲松、头孢拉定、万古霉素、四环素共17种药敏试纸均购于OXOID公司

2.2 方法

2.2.1 PCR鉴定

2.2.1.1 引物合成

参考NCBI上猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪链球菌、副猪嗜血杆菌特异蛋白的基因序列，用Primer 5.0 软件分别设计了它们具有高特异性和敏感性的引物，对分离到的疑似猪蓝耳病毒、链球菌和副猪嗜血杆菌进行PCR鉴定，引物序列及扩增片段长度，由苏州泓迅生物科技有限公司合成（表1）。

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