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在分析程序中,洗板虽不是反应步骤,但也是决定实验成败的关键因子之一。目的是吸去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。通过上述方法可以很好提高酶联免疫分析的准确性,将吸光度变异系数控制在有效范围内,并将添加回收率控制在有效范围内,确保分析数据的准确性。 5结果与分析 表1、不同试剂盒吸光度变异系数试验结果表 (单位ug /L) 处理项目 | 0.1 | 0.3 | 0.9 | 2.7 | 8.1 | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | 试 剂 盒 A | 吸光度 | 1.92 | 1.971 | 1.944 | 1.56 | 1.428 | 1.493 | 0.99 | 0.874 | 0.929 | 0.44 | 0.390 | 0.431 | 0.23 | 0.222 | 0.228 | 浓度均值 | | 0.1 | | | 0.3 | | | 0.899 | | | 2.709 | | | 8.060 | | 变异系数(%) | | 0 | | | 0 | | | 0.1 | | | 0.3 | | | 0.5 | | 试 剂 盒 B | 吸光度 | 1.75 | 1.883 | 1.816 | 1.22 | 1.259 | 1.241 | 0.71 | 0.688 | 0.700 | 0.36 | 0.376 | 0.369 | 0.20 | 0.203 | 0.202 | 浓度均值 | | 0.099 | | | 0.300 | | | 0.901 | | | 2.689 | | | 8.088 | | 变异系数(%) | | 0.1 | | | 0 | | | 0.1 | | | 0.4 | | | 0.2 | |
备注:Ⅲ代表平均值 从表一可以看出,试剂盒浓度为0.1-8.1ug /L时, 德国拜发试剂盒与北京望尔试剂盒变异系数分别为0-0.5%与0-0.4%之间,这说明在相同的条件下,两种试剂盒对克伦特罗均具有较高的灵敏度。 表2、两种不同试剂盒添加回收率试验结果表 (单位:ug/kg, ug /L) 样品名称 | 猪肝 | 猪尿 | 添加浓度 | 1 | 0.25 | 回收率(%) | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅳ | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅳ | 试剂盒A | 76.9 | 75.3 | 79.4 | 77.2 | 88.0 | 83.1 | 85.0 | 85.4 | 试剂盒B | 61.03 | 63.0 | 70.0 | 64.7 | 114.9 | 108.0 | 87.0 | 103.3 |
备注: Ⅳ代表平均值 从表2可以看出两种不同厂家生产的试剂盒在测定克伦特罗残留量时,添加浓度1.0ug/kg、0.25 ug/L时,添加回收率均能达到61.03-114.9%之间,属有效范围,均可用于生产实际中。二种试剂盒对猪尿敏感性均较好于猪肝,德国拜发生产的试剂盒添加回收率稳定性略高于北京望尔公司生产的试剂盒。 6小结 6.1从本次试验结果可以看出,酶联免疫吸附法具有操作简单、灵敏度高、成本低、可批量检测等优点,适合县级畜产品质量检测机构进行快速测定使用。 6.2影响试剂盒测定准确率的因子多种多样,但最主要的影响因子为试验制备过程中的温度、转速、流速,同时在洗板过程中必须做到5个注意事项以提高检测准确率。 6.3本次试验未与高效液相色谱及气质联用色谱法同步跟踪,其关联性还有待于进一步研究。 7参考文献(略)
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