产品监测
畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量测定方法
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1 主题内容与适用范围 本标准规定了畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的检测方法。 本标准适用于各种畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定。最低检出浓度为:0.15，0.20，0.65mg/kg。 2 原理 样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测器检测，与标准比较定量，出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。标准加法定量。 3 试剂 3.1 乙腈(分析纯)。 3.2 0.01mol/L磷酸二氢钠溶液:称取1.56g(±0.01g)磷酸二氢钠(NaH2PH4·2H2O)溶于蒸馏水中，定容到100mL，经微孔滤膜(0.45μm)过滤，备用。 3.3 土霉素(OTC)标准溶液:称取土每素0.0100g(±0.0001g)，用0.1 mol/L盐酸溶液每毫升含土霉素1mg。 3.4 四环素(TC)标准溶液:称取四环素0.0100g(±0.001g)，用0.01mol/l盐酸溶液溶解并定容10.00mL，此 溶液每毫升含四环素1mg。 3.5 金霉素(CTC)标准溶液:称取金霉素0.0100g(±0.0001g)，溶于蒸馏水并定容成10.00mL，此溶液每毫升含金霉素1mg。 以上标准品均按1000单位/mg折算。3.3～3.5溶液应于4℃以下保存，可使用1周。 3.6 混合标准溶液:取3.3、3.4标准溶液各1.00mL，取3.5标准溶液2.00mL，置于10mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四环素各0.1mg，金霉素0.2mg，临时现配。 3.7 5%高氯酸溶液。 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪(HPLC):具紫外检测器。 5 色谱条件 5.1 柱:ODS-C18(45μm)6.2mm×15cm。 5.2 检测波长:355nm。 5.3 灵敏度:0.002AUFS。 5.4 柱温:室温。 5.5 流速:1.0mL/min。 5.6 进样量:10μL。 5.7 流动相:乙腈/0.01mlo/L磷酸二氢钠溶液(用30%V/V)硝酸溶液调节pH2.5)，35:65(V/V)， 使用前用超声波脱气10min。 6 操作方法 6.1 样品测定:称取5.00g(±0.01g)切碎的肉样(＜5mm)，置于50mL锥形烧瓶中，加入5%高氯酸25.0mL，于振荡器上振荡提取10min，移入到离心管中，以2000r/min离心3min，取上清液经0.45μm滤膜过滤，取溶液10μL进样，记录峰高，从工作，工线上查得含量。 6.2 工作曲线:分别称取7份切碎的肉样，每份5.00g(±0.01g)，分别加入混合标准溶液0、25、50、100、150、200、250μL(含土霉素、四环素各为0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μg)，含金霉素0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0μg)，按6.1方法操作、 RT峰高为纵坐标，以抗生素含量为横坐标，绘制工作曲线。 6.3 计算 A×1000 X=----------------------- m×1000 式中:X——样品中抗生素含量，mg/kg； A——样品溶液测得抗生素质量，μg； m——样品质量，g。 |