兽医战略
猪圆环病毒病研究进展
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四、猪圆环病毒病的诊断 根据流行病学、临床症状和剖检病变等可对本病做出初步诊断，但要做到确诊还需要借助于实验室的诊断技术和方法。 （一）针对病毒抗原的诊断技术 1.PCR技术 从PCV-2的DNA链上设计一对特异性引物进行PCR反应，可直接检测组织病料及细胞培养物中的病毒核酸，是一种快速、简便、特异的诊断方法，现在已经发展出多种改进的PCR方法。 多重PCR可以简单、方便地同时检测2种或2种以上的病毒DNA，现已广泛应用于疾病的快速诊断等方面。2003年Kim J等建立了从精液中同时检测PCV和PPV的多重巢式PCR方法。他们对98份样品进行了检测，结果20份(20.4%)为PCV阳性，42份(42.9%)为PPV阳性。该结果表明：多重巢式PCR方法比传统的病毒分离方法更敏感、快速。Yu等建立了一种反转录PCR(RT-PCR)方法来检测复制型病毒。作者设计了2对引物，1对引物是扩增 PCV-2ORF2基因的全长DNA(984bp)，另1对是扩增经切割的ORF2衣壳蛋白的mRNA(594bp)。结果从病毒培养物的DNA中只能扩增出984bp片断，不能扩增出594bp片断，而从提取的 PCV-2 RNA中只能扩增出594bp片断，并且最早可在病毒感染后14 h检测到。 2.核酸杂交技术 Rosell C等用杂交技术从30头患猪中检测到了28份阳性，并发现病毒的DNA主要位于淋巴器官，尤其存在于淋巴结部位。也在同一年里， Sirinarumitr T等利用荧光标记RNA的探针与细胞中的病毒核酸或与福尔马林固定的、石蜡包埋的组织中的PCV病毒核酸进行杂交，建立了快速检测PCV的原位杂交技术，他们在该方法中,应用了快速加强杂交缓冲液进行杂交，结果仅需7~8 h，这比传统的杂交方法大大缩短了检测时间，因而它更适用于对常规PCV的诊断。 （二）针对病毒抗体的诊断技术 1.间接免疫荧光(IFA) 间接免疫荧光技术常用于猪圆环病毒感染的血清学普查，其特点是快速、特异、敏感，是目前诊断PCV-2常用的血清学方法。在用于抗体检测时，可将PCV-2接种于96孔细胞培养板的PK-15细胞上，培养一定时间后，经丙酮固定，干燥后即可。2004年，Racine S等将PCV-2 IAF-2897株的ORF2克隆入真核表达载体pCEP5中,并获得了大量的表达，他们用IFA技术对PMWS猪场的44份血清样品进行了检测，结果15份为PCV-2阳性，检出率为57.1%。IFA方法不仅可以用于检测抗体，而且可以用已知PCV特异性抗体检测抗原，主要用于PCV的分离鉴定及猪源细胞PCV污染情况的普查，为疾病诊断和净化猪源细胞提供了有效手段。 2.酶联免疫吸附试验(ELISA) ELISA方法具有灵敏、快速的特点。Blanchard等用在昆虫细胞中表达的GST-ORF-2融合蛋白为抗原建立了一种ELISA检测方法，结果表明ELISA方法灵敏、特异性好，能区分PCV-1和PCV-2。说明应用表达蛋白为抗原建立ELISA方法，其抗原制备较简单，产量高，灵敏性和特异性都很好，因此更适用于临床检测及大规模血清学调查。国内崔尚金等采用PCV抗原和正常细胞对照抗原，建立了间接ELISA，并被农业部推荐为进行流行病学调查的方法。 五、猪圆环病毒的防制 由于至今对PCV-2引起的相关疾病的病原和致病机制尚未完全了解，因此，还不能完全依赖特异性防制措施，只有同时结合良好的饲养管理，采取综合性的防制措施，才能更好的控制疾病的发生。 1.目前还没有有效的疫苗可以用来预防PCV的感染。虽然国内外已研制出基因工程苗、亚单位疫苗，但因PMWS并非仅由PCV引起, PCV-2的共同感染源很多，不同猪场的疾病谱往往不同，发病猪场首先要确定自身的共同感染源，并应用相应的疫苗对母猪实施合适的免疫，对确保妊娠期胎儿和哺乳仔猪的安全相当重要，与此同时，通过病原检测确定母源抗体消失后的仔猪和育成猪的共同感染源，采用合适的疫苗和药物防治，才能收到应有的效果。 2.良好的饲养管理是预防本病发生的关键。要做到合理的分群与混养，适度降低饲养密度,保持圈舍通风良好，有效杀灭圈舍内蚊蝇，以减少和降低可能诱发疾病发生的一切不良应激因素；饲喂优质全价饲料，严禁用霉变饲料喂猪，以保持猪的良好体质；实行严格的全进全出制度，避免将不同日龄的猪混群饲养，从而减少和降低猪群之间PCV及其它病原的接触感染机会；建立完善的生物安全体系，将消毒卫生工作贯穿于养猪生产的各个环节；避免从疫区引进猪只,严格控制外来人员、车辆、货物等进入猪场。 3.本病无特效药物可治。对于早期发现的疑似感染猪要进行检查、隔离、淘汰，以控制病情传播。对没症状的同群猪可在饲料中添加抗菌素、中药抗病毒药物及增强机体免疫力的药物，对控制并发或继发感染和病情的发展有一定效果，对病猪必须采取注射给药。 参考文献（略） |
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