预防兽医

影响家禽灭活疫苗质量的因素

日期：03-03 作者：阳光畜牧网- 小 + 大

    灭活疫苗是指将完整的病毒或细菌等病原微生物的活性成分经化学或物理方法灭活（即使其失去感染力和毒力）后再辅以适当佐剂制成的疫苗，通过非胃肠道途径免疫动物，以使被免疫者产生坚强和持久的免疫力。灭活疫苗在当今预防禽病的重任中起着越来越重要的作用，除常用于刺激蛋鸡和种鸡免疫系统以延长抗体反应外，近年来还用于免疫商品代肉用型雏鸡预防ND、IB、IBD等疾病，或单独用在没用过活毒疫苗的鸡群（如禽流感灭活疫苗）。为了更好的发挥灭活疫苗在禽病防疫中的作用，本文就影响灭活疫苗品质的有关因素作简要概述，以帮助使用者认识和了解继而正确选择和使用之。
    1、活性成分（或称抗原）
    (1) 抗原性：
    制苗用种毒或种菌应选用抗原性强和毒力低且遗传性能稳定的毒株和菌株。抗原性的强弱将直接影响疫苗的保护力。宁宜宝等比较了不同菌株制成的鸡毒支原体油苗的免疫效果，认为不同菌株虽属同一血清型，但菌株间存在明显的抗原差异，保护效果不同。日本学者Kume研究了不同血清型副鸡嗜血杆菌菌株的抗原性，认为221株（A型）和H18株（C型）制成的疫苗可以产生交叉保护从而保护鸡抵抗所有血清型菌株的攻击。毒株和菌株的毒力与抗原性强弱有的成正比关系，有的则无相关性。如新城疫病毒的毒力与抗原性并不一定成正比关系，实验证明用NDV Ulster 2C弱毒株（ICPI 0.0）制作的油苗与NDV Texas GB强毒株 (ICPI 1.75)制成的油苗相比，二者所诱导的抗体滴度和抵御强毒攻击的保护率没有显著性差异，因此在抗原性相似时最好选择低毒力的毒株或菌株制作的疫苗。这一方面可以避免灭活不完全而造成人为攻毒，另一方面由于欧共体早在1995就规定并实施用于制作新城疫灭活疫苗的毒株的毒力不得高于ICPI 0.7，所以对欧出口的肉鸡应选用符合要求的疫苗。病毒和细菌在传代过程中有的会发生遗传变异而改变抗原性，故选择新分离毒株或菌株作为疫苗种毒时，应考虑多次传代后有潜在的抗原变异的危险性。
    (2)抗原浓度：
    灭活疫苗内所含的病原微生物在接种到鸡体内后不能再繁殖，因此要求疫苗含有较高的抗原浓度以确保免疫后抗体达到一定的高度和维持较长的时间。疫苗品质与抗原浓度密切相关，但如何才能确保疫苗含有合适的抗原浓度呢？尤其对多联多价苗而言，如何确保各种抗原浓度都达到要求而又不影响水相和油相的配比或不增大剂量？唯一的方法就是浓缩抗原，这其实是众所周知但同时又是很难掌握的灭活疫苗制作的关键技术。抗原浓缩后可以根据需要作不同比例的稀释用于配制不同的联苗而不影响油和水的配比比例，达到乳化效果好、粘度低，从而确保了疫苗品质。同时还可减少注射剂量，如每羽份从0.5 ml或1 ml降至0.3 ml。但应当指出的是，并不是抗原浓度越高疫苗的品质就越好，因为当抗原浓度低时，抗体水平随抗原浓度的增加而提高；当抗原增加到一定浓度后，抗体并不会随抗原浓度的增加而增加。相反，有的疫苗，尤其是细菌性灭活疫苗，会因抗原浓度过高而引起较强烈的免疫副反应。所以在评估疫苗的品质时不能只了解其灭活前的病原微生物含量，还应了解接种疫苗后的抗体上升速度和高度，以及维持时间。
    2、灭活剂
    灭活剂的作用是杀死病原微生物或去处其致病力，在此同时应最大程度的保留病原微生物的抗原性。不同的灭活剂对杀死不同的病原微生物所需的浓度和时间不同、对其抗原性的破坏程度也不同。因此对不同的微生物应选择最合适的灭活剂，以达到灭活剂用量少、对抗原破坏少和对组织刺激小之目的。如南京梅里亚通过不断的比较试验，最后选择丙酰内脂灭活NDV和IBV、甲醛灭活IBDV、硫柳汞则灭活副鸡嗜血杆菌，而有的厂家只用甲醛作所有病原微生物的灭活剂。
    3、佐剂
    灭活的抗原免疫时不仅需要剂量大，而且免疫期短。为了增强其免疫效果和延长免疫期，常常要加入适当的佐剂。所谓的佐剂，即当一种物质先于抗原或与抗原混合后注射于动物体内，能非特异性地增强机体对该抗原的特异性免疫应答，发挥其辅助作用者称之。佐剂的作用主要有三点，其一，在接种部位形成抗原储存库，使抗原缓慢释放；其二，辅助抗原暴露并将能刺激特异性免疫应答的抗原表位提呈给免疫细胞；第三，诱导能介导免疫应答的细胞因子释放。由此可以看出，佐剂的品质直接影响疫苗的品质。油乳剂型疫苗的佐剂应选择重量轻、无多环芳烃化合物、粘度低、无色、无味、无毒、对组织刺激小、易被吸收和能增强抗原免疫效果和延长免疫期的物质。有的灭活疫苗使用10号或7号白油为佐剂，由于它们是一种副产品，没有质量标准，其成分和含量各个厂家和不同的时间可能不同，所以用它作佐剂往往难以保证稳定的品质，且制作的疫苗对接种部位的肌肉组织刺激大，容易引起炎性反应（如图1所示）。用植物油和动物油作佐剂，这类佐剂引起的组织反应大大降低，但他们诱导的免疫反应水平也低。铝胶佐剂（氢氧化铝胶）的质量与佐剂活性有极为重要的关系，进口的铝胶一般是分子细腻（性状稀薄）、胶体性良好、稳定和吸附力强。
    4、乳化剂和乳化工艺：
    为了使抗原和油佐剂这两种不相容的溶液形成乳剂，必须加入亲水性和亲油性两种乳化剂，此过程也称乳化。乳化剂的类型较多，化学成分也不完全相同，每种乳化剂都有一定的亲水亲油平衡值，制作疫苗时应根据所要形成的乳剂型和所采用的乳化工艺选择相对应的乳化剂，因此乳化剂的品种和品质同样会影响所形成乳剂即疫苗的稳定性，多数国产灭活苗用司本-80和吐温-80为乳化剂。乳化工艺则直接关系到疫苗的品质，即疫苗的安全性、效力和稳定性直接与乳化作用的好坏相关。有的灭活苗的乳化工艺非常简单，只经简单搅拌；，好的灭活苗除搅拌外还须经胶体磨充分乳化从而使疫苗均质稳定，保存时间也长，4℃可放置2年半。乳化好的疫苗，应该是油包水或水包油型，粘度低、颗粒大小均匀、稳定性好。
    以上几点说明，灭活疫苗的品质与多种因素密切相关，只有各种因素都达到要求时才能生产出优质的产品。

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