兽医战略
副猪嗜血杆菌病研究进展
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近年来，副猪嗜血杆菌病在中国大部分地区危害日趋严重，这可能与该菌的血清型多且无交叉免疫力有关。按Kieletein—Rapp-Gabrielson(KRG)血清分型方法(Kielstein等，1992)，副猪嗜血杆菌至少有15种血清型，其中血清1、5、10、12、13、14型毒力最强，患猪死亡或处于濒死状态;血清2、4、8、15型具有中等毒力，患猪死亡率低，但生长迟缓;血清3、6、7、9、11型不能引起临床感染。从世界范围看，血清4、5、13型最为流行，日本、德国、美国等以血清4、5型最为常见，澳大利亚分离的菌株主要为血清5、13型，但有大约20%的分离菌尚无法定型。位于猪体不同部位的菌株，其血清型可能不同。据报道，血清3型主要存在于猪的上呼吸道，所以其毒力可能低;而在肺炎病变区及多发性关节炎腔等部位分离的菌株主要是血清4、5型，如美国和加拿大从发病动物分离的菌株大约40%为血清4或5型，说明这两个血清型为主要的流行致病株。传统的血清分型方法是根据热稳定性可溶性抗原间接血凝试验(IHA)和琼脂扩散试验(AGPT)来进行。Tadjine等(2004)报道，将副猪嗜血杆菌全细胞悬液煮沸，以上清为抗原制备抗血清，15个标准株的间接血凝试验和免疫扩散试验都显示了较高的特异性，仅5型和1型在免疫扩散试验中出现交叉反应;Turni等(2005)用间接血凝和凝胶扩散试验对副猪嗜血杆菌血清学分型进行比较。试验了15个血清型参考株、72个澳大利亚分离株、9个中国分离株。用IHA可以将15个参考株中的14个进行正确分型，将81个分离株中的45个进行血清学分型；而凝胶扩散试验可以将15个参考株中的13个进行正确分型，将81个分离株中的48个进行血清学分型。 4、致病因子 4.1荚膜 据报道，分离白健康猪上呼吸道的大多数副猪嗜血杆菌都有荚膜，而从其他部位分离的菌株中以无荚膜的菌株占多数。通过活体传代的方法可筛选出荚膜化的副猪嗜血杆菌克隆，而在培养基上传代后有荚膜的细菌数量减少。 4.2外膜蛋白(OMP) Ruiz等(2001)研究结果表明，外膜蛋白与Hps的毒力有关，健康仔猪与患病猪分离的Hps 0MP不同。研究人员对副猪嗜血杆菌的菌体蛋白和外膜蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDs_PAGE)的结果显示不同菌株之问的蛋白质图谱具有差异，在毒力和某种特定蛋白质之间可能存在着联系，潜在的致病性Hps分离株具有一群分子质量约37 ku大小的蛋白质组(Nicolet等，1980)，将这些细菌分类为聚丙酰胺电泳PAGE 1I型，将缺乏这种特殊蛋白质组的Hps分离株分类为PAGEI型。Miniats等(1991)报道，不同血清型的菌株抗原性不同，毒力和免疫保护作用呈正相关。免疫动物的抗体主要针对OMP而不是脂多糖和荚膜多糖，证明oMP有更强的免疫原性。 4.3脂多糖(LPS) 脂多糖可能是一个主要的毒力因子，血清中的LPS可能与血栓形成、血管内凝物的传播密切相关，其产生的超氧化物歧化酶有助于抗吞噬。 4.4转铁结合蛋白(tbp) 转铁结合蛋白由两种不同的蛋白构成，即转铁结合蛋白A(tbpA)和转铁结合蛋B(tbpB)，它们对宿主具有特异性。tbpA可能是一种穿膜蛋白，而tbpB靠N端脂肪酸残基镶嵌在外膜上，通过两者的协同作用，捕获宿主的转铁蛋白，通过tbpA把铁运送到外膜内并被胞浆周围的铁结合蛋白所结合，为细菌生长提供必需的铁离子，在副猪嗜血杆菌感染动物中发挥决定性的作用。 4.5神经氨酸酶 神经氨酸酶可通过夺取宿主细胞的碳水化合物发挥细菌毒力。该酶可清除与宿主细胞糖原结合的唾液酶，从而暴露出细菌定居或侵入宿主细胞所需的受体，可通过降低宿主细胞的黏性和黏液素对其防御系统进行干涉。与哺乳动物的大多膜结合神经氨酸酶相反，该酶抽提后很稳定，证明该酶为一个潜在的毒力因子。 5、诊断 根据临床症状、剖检病变和细菌分离鉴定可对副猪嗜血杆菌感染作出常规诊断，现主要介绍其血清学和分子生物学诊断方法。 5.1血清学诊断 间接血凝试验(IHA)及酶联免疫吸附试验(EI。lsA)等叮用于检测副猪嗜血杆菌抗体。魏子贡等(2006)将副猪嗜血杆菌血清4、5型分离菌株经超声波破碎处理后的产物致敏醛化红细胞，建立了检测Hps抗体的IHA，结果表明，该方法敏感性较高，特异性强，重复性好，可用于疫苗免疫后抗体水平的检测及副猪嗜血杆菌的流行病学调查。Solano—Aguilar等(1999)用福尔马林灭活的全细胞作为包被抗原进行ELISA试验，研究母源抗体滴度和小猪免疫后的体液反应，它可以检测到免疫母猪所产的5日龄小猪的母源抗体。王艳等(2006)采用福尔马林灭活的副猪嗜IIlL杆菌全菌作为包被抗原，建立了副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体的检测方法，经试验确定该方法有很高的特异性和重复性，14个发病猪场100份血清检测结果Hps抗体阳性检出率为94%，明显高于细菌分离鉴定检测结果。 |
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