3.5 室温下孵育30分钟。 3.6 每孔加约350μL的蒸馏水或去离子水进行洗板,洗3~5次。 3.7 每孔加100μL的酶标羊抗鸡抗体(HRPO)。 3.8 室温下孵育30分钟。 3.9 重复第6步。 3.10 每孔加100μL的TMB底物液。 3.11 室温下孵育15分钟。 3.12 每孔加100μL的终止液。 3.13 酶标仪空气调零。 3.14 测定并记录各孔于650nm波长的吸光值(A650)。 4 结果判定 4.1 阳性对照平均值和阴性对照平均值的差值大于0.10,阴性对照平均值小于或等于0.150,该检测结果才能有效。 4.2 被检样品的抗体水平由其测定值与阳性对照测定值的比值(S/P)确定。抗体滴度按下列方程式进行计算。 阴性对照平均值NC=[A1(A650)+A2(A650)]/2 阳性对照平均值PC=[A3(A650)+A4(A650)]/2 S/P比值=(样品平均值-NC)/(PC -NC ) 4.3 S/P比值小于或等于0.6,判为阴性。 4.4 S/P值大于0.6,判为阳性,表明被检血清中存在J-亚群禽白血病病毒抗体。 附件3 消毒 |
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