3.5 室温下孵育30分钟。
3.6 每孔加约350μL的蒸馏水或去离子水进行洗板，洗3～5次。
3.7 每孔加100μL的酶标羊抗鸡抗体（HRPO）。
3.8 室温下孵育30分钟。
3.9 重复第6步。
3.10 每孔加100μL的TMB底物液。
3.11 室温下孵育15分钟。
3.12 每孔加100μL的终止液。
3.13 酶标仪空气调零。
3.14 测定并记录各孔于650nm波长的吸光值（A650）。
4 结果判定
4.1 阳性对照平均值和阴性对照平均值的差值大于0.10，阴性对照平均值小于或等于0.150，该检测结果才能有效。
4.2 被检样品的抗体水平由其测定值与阳性对照测定值的比值（S/P）确定。抗体滴度按下列方程式进行计算。 阴性对照平均值NC=[A1（A650）+A2（A650）]/2 阳性对照平均值PC=[A3（A650）+A4（A650）]/2 S/P比值=（样品平均值-NC）/（PC -NC ）
4.3 S/P比值小于或等于0.6，判为阴性。
4.4 S/P值大于0.6，判为阳性，表明被检血清中存在J-亚群禽白血病病毒抗体。 附件3 消毒
1 消毒前的准备
1.1 消毒前必须清除有机物、污物、粪便、饲料、垫料等；
1.2 消毒药品必须选用对J-亚群禽白血病病毒有效的，如烧碱、醛类、氧化剂类、酚制剂类、氯制剂类、双季胺盐类等。
1.3 备有喷雾器、火焰喷射枪、消毒车辆、消毒防护器械（如口罩、手套、防护靴等）、消毒容器等。
1.4 注意消毒剂不可混用.
2 消毒范围
禽舍地面及内外墙壁，舍外环境；饲养、饮水等用具，运输等设施设备以及其它一切可能被污染的场所和设施设备。
3 消毒方法
3.1 金属设施设备的消毒，可采取火焰、熏蒸等方法消毒；
3.2 圈舍、场地、车辆等，可采用消毒液清洗、喷洒等方法消毒；
3.3 养禽场的饲料、垫料等，可采取深埋发酵处理或焚烧处理等方法消毒；
3.4 粪便等可采取堆积密封发酵或焚烧处理等方法消毒；
3.5 饲养、管理等人员可采取淋浴等方法消毒；
3.6 衣帽鞋等可能被污染的物品，可采取浸泡、高压灭菌等方法消毒；
3.7 疫区范围内办公、饲养人员的宿舍、公共食堂等场所，可采用喷洒的方法消毒；
3.8 屠宰加工、贮藏等场所以及区域内池塘等水域的消毒可采取相应的方法进行，并避免造成有害物质的污染。
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