规范标准

牛结核病防治技术规范

日期:12-17 作者:农业部兽医局- 小 + 大

    附件:样品集菌方法 
    痰液或乳汁等样品,由于含菌量较少,如直接涂片镜检往往是阴性结果。此外,在培养或作动物试验时,常因污染杂菌生长较快,使病原结核分枝杆菌被抑制。下列几种消化浓缩方法可使检验标本中蛋白质溶解、杀灭污染杂菌,而结核分枝杆菌因有蜡质外膜而不死亡,并得到浓缩。
    1 硫酸消化法
    用4-6%硫酸溶液将痰、尿、粪或病灶组织等按1:5之比例加入混合,然后置37℃作用1-2小时,经3000-4000rpm离心30分钟,弃上清,取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。也可用硫酸消化浓缩后,在沉淀物中加入3%氢氧化钠中和,然后抹片镜检、培养和接种动物。
    2 氢氧化钠消化法
    取氢氧化钠35-40g,钾明矾2g,溴麝香草酚兰20mg(预先用60%酒精配制成0.4%浓度,应用时按比例加入),蒸馏水1000mL混合,即为氢氧化钠消化液。
    将被检的痰、尿、粪便或病灶组织按1:5的比例加入氢氧化钠消化液中,混匀后,37℃作用2-3小时,然后无菌滴加5-10%盐酸溶液进行中和,使标本的pH调到6.8左右(此时显淡黄绿色),以3000-4000rpm离心15-20分钟,弃上清,取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。
    在病料中加入等量的4%氢氧化钠溶液,充分振摇5-10分钟,然后用3000rpm离心15-20分钟,弃上清,加1滴酚红指示剂于沉淀物中,用2N盐酸中和至淡红色,然后取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。
    在痰液或小脓块中加入等量的1%氢氧化钠溶液,充分振摇15分钟,然后用3000rpm离心30分钟,取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。
    对痰液的消化浓缩也可采用以下较温和的处理方法:取1N(或4%)氢氧化钠水溶液50mL,0.1mol/L柠檬酸钠50mL,N-乙酰-L-半胱氨酸0.5g,混合。取痰一份,加上述溶液2份,作用24-48小时,以3000rpm离心15分钟,取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。
    3 安替福民(Antiformin)沉淀浓缩法
    溶液A:碳酸钠12g、漂白粉8g、蒸馏水80mL。
    溶液B:氢氧化钠15g、蒸馏水85mL。
    应用时A、B两液等量混合,再用蒸馏水稀释成15-20%后使用,该溶液须存放于棕色瓶内。
    将被检样品置于试管中,加入3-4倍量的15-20%安替福民溶液,充分摇匀后37℃作用1小时,加1-2倍量的灭菌蒸馏水,摇匀,3000-4000rpm离心20-30分钟,弃上清沉淀物加蒸馏水恢复原量后再离心一次,取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。

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